[工学]结构与性能 Chapter 3.pptVIP

蛋白质一级结构的测定 样品必需纯（97%以上）； 知道蛋白质的分子量； 知道蛋白质由几个亚基组成； 测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。 可以将生物组织的含氮量近似地看作蛋白质的含氮量。由于大多数蛋白质的含氮量接近于16%，所以，可以根据生物样品中的含氮量来计算蛋白质的大概含量。 2、测定步骤 (1) 多肽链的拆分： 由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。 几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链（亚基）。 (2)二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。 巯基（-SH）的保护 (3)测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比 Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）。 在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。 在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-端氨基酸的游离氨基作用，