一种大容量天然人源核糖体展示单链抗体文库的构建.pdfVIP

重庆医学 2009年 5月第37卷第9期 1O53 · 论 著 · 一 种大容量天然人源核糖体展示单链抗体文库的构建 陈 锐，刘友生△，朱 江，段光杰，葛晓冬 (第三军医大学西南医院病理科 ，重庆 4O0O38) 摘 要：目的 构建大容量天然人源核糖体展示单链抗体 (singlechainFv，scFv)文库，为抗体研究提供方便有效的技术平 台。方法 收集健康献血志愿者的白细胞悬液，离心分离单个核细胞 ，抽提其总 RNA，逆转录成 eDNA、PCR及重叠延伸 PCR法 构建 scFv文库 ，并通过第 2次重叠延伸 PCR在 scFvDNA序列5端添加 T7启动子、茎环结构、核糖体结合位点，其 3端添加 6× His标签、间隔序列(基 因UI)、茎环结构等改造成核糖体展示天然人源 scFv文库 。结果 成功构建 了可用于筛选抗体 的核糖体 展示文库容量达 10”以上 。结论 成功构建 了大容量天然人源核糖体展示scFv文库 ，为筛选到高亲和力和特异性抗体提供 了技 术平台。 关键词 ：核糖体展示 ；文库 ；天然人源单链 Fv(scFv)抗体 中图分类号：Q785；R392．1l 文献标识码 ：A 文章编号：1671—8348(2O09)09—1053—03 ConstructionofalargenaivehumansinglechainFv(scFv)libraryforribosomedisplay CHENR “，LjUYou—sheng ，ZHUJiang，eta1． (DepartmentofPathology，SouthwestHospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400038，China) Abstract：Objective ToconstructalargenaivehumansinglechainFv(scFv)libraryforribosomedisplay，whichprovidesa convenientandeffectiveplatform forantibodyresearch．Methods Whitebloodcellssuspensionofahealthydonorwerecollected andcentrifugedtoisolatemononuclearcells．AndtotalRNA ofmononuclearcellswereisolatedandreversetranscribedtoconstruct scFvlibrarybyPCR andoverlapextensionPCR amplification．A secondoverlapextensionPCR amplificationwasusedtoaddT7 promoter，stem loopstructure，ribosomebindingsitestothe5 endand6×Histag，spacer(gene11I)，stem loopstructuretothe3 endofscFvDNA sequence．InthiswayanaivescFvlibraryforribosomedisplaywasconstructed．Results A largenaivehuman scFvlibrarycontaining 10”membersforribosomedisplaywassuccessfullyconstructed．Conclusion ThelargenaivehumanscFv libraryforribosomedisplaywillbeausefulplatform forselectionofantibodieswithhighaffinityandspecificity． Keywords：ribosomedisplay；library；naivehumansinglechainFv(scFv)antibody 抗体库技术是将基 因工程与抗体生产技术相结合 ，通过建 量 PBS稀释后