分子生物学总结by生科狐狸要起早蛋白质名词解释.docVIP

分子生物学总结 ——By 生科2005 狐狸要起早 蛋白质 一、名词解释 Motif:（超二级结构）：多肽链内顺序上相邻的二级结构常在空间折叠中靠近，彼此相互作用形成规则的二级结构聚集，常与蛋白质和核酸的作用有关。 Domain:（结构域）：相邻的超二级结构紧密联系，形成二个或多个空间上明显突出的局部区域。与分子整体以共价键相联，不易分离，是蛋白质的结构单位。 蛋白质组学：在给定条件下对任何特定细胞类型的所有表达蛋白进行分析和鉴定。 锌指结构： 离子交换层析： 亲和层析： 蛋白免疫印迹（Western blot）： 二、简答论述： 许多蛋白含有多个亚基，有些蛋白只有一个结合位点，有些有几个结合位点，使预测一下这两类蛋白的结合位点所处的位置： 1个结合位点位于所有亚基的结合处，多个结合位点可以在远离亚基与亚基的结合处，结合位点数等于亚基数，也可以位于亚基和亚基的结合处，结合位点等于亚基数的一半，例如血红蛋白。 三、实验： 蛋白质的纯化： 1、凝胶过滤层析（分子筛，分子大小） 2、离子交换层析（电荷），阴离子（EDTA-sephadex），阳离子（磷酸纤维素） 3、亲和层析（酶-底物，受体-配体，抗原-抗体） 4、电泳（SDS，等点聚焦，双向电泳） SDS： SDS的作用：A、封闭蛋白本身所带电荷，使蛋白质均带负电荷；B、使二硫键打开，导致蛋白变性。 一条电泳带不是指含有一种蛋白质，因为电泳对蛋白质的分离只是根据分子量，分子量相同不一定是一种蛋白，而且打开了二硫键，已破坏了蛋白质的结构，有可能这一条电泳带只是蛋白质中的一个亚基。 什么是蛋白质组学？如果只知道编码某个蛋白的cDNA序列，你能利用那些有关蛋白质研究和分子生物学的方法，来获得关于该蛋白的那些信息？ 蛋白质组学是在一种细胞内，一个细胞不同生活史中或不同类型的细胞中，研究细胞内蛋白质性质成分功能。cDNA序列是编码表达的mRNA的互补序列。已知cDNA序列：a、PCR进行突变，转染到细胞内进行研究，专基因方法得到生物体，研究其功能。b、PCR获得cDNA序列，连接到表达载体上，转到宿主细胞内，让蛋白质大量表达，再分离出来层析，对蛋白质进行结构研究，测定其分子量。C，得到氨基酸序列，通过时能感悟信息学预测蛋白质的二级结构，研究其功能。 在一个二倍体细胞中，编码酶E的一对等位基因为（+/-），其表型为E+，假设你分离到一个表型为E-的突变体，但其等位基因+仍继续存在，试解释该现象： 酶是多亚基的蛋白质，等位基因编码蛋白质的一个亚基，该亚基正常，但其他亚基却是隐性的，导致了整个酶的失活。 核酸 一、名词解释 回文结构：又称反向重复序列，即该片段的碱基顺序在互补链之间正读反读都相同。 核酸变性： 增色效应： 核酸探针： 卫星DNA： 超螺旋： 解链温度： 筑巢PCR：先用一对外侧引物扩增含目的基因的大片段，再用内侧引物以大片段为摸板扩增获取目的基因。可以提高PCR的效率和特异性。 原位PCR：以组织固定处理细胞内的DNA或RNA作为靶序列，进行PCR反应的过程。 兼并引物PCR（DOP-PCR）：前提是一段保守的氨基酸序列。目的：克隆出一个未知的新基因。特点：引物特殊，用兼并引物（由于密码子具有兼并性，引物上的某些核苷酸不确定可以有保守序列倒推而来。） 反向PCR：前提是一个基因或一段DNA序列的中间一段序列。目的：已知中间的序列得到完整的一段DNA或基因。特点：将原DNA酶切环化，引物是相反的。 嵌套PCR：目的：增强PCR精准性。特点：引物是嵌套性的，一条位于基因外侧的引物，一条基因引物。 多重PCR：目的：同时得到2个或个以上的DNA片段。特点：引物是不同的、多对的。 定量PCR：目的：对产物PCR进行定量。特点：反应体系中加入已知量的DNA进行对比。 RACE（cDNA末端的快速扩增） 基因打靶：是指通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。 DNA芯片：DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。由于常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为DNA芯片。 RFLP：即限制性片段长度多态性，个体之间DNA的核苷酸序列存在差异，称为DNA多态性。若因此而改变了限制性内切酶的酶切位点则可导致相应的限制性片段的长度和数量发生变化，称为RFLP。 SSCP：单链构象多态性检测是一种基于DNA构象差别来检测点突变的方法。相同长度的单链DNA，如果碱 基序列不同，形成的构象就不同，这样就形成了单链构象多态性。 基因治疗：一般是指将限定的遗传物质转入患者特定的靶细胞，以最终达到预防或改变特殊疾病状态为