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利用豌豆根尖微核技术检测几种洗衣粉的毒性 陈康 （华南师范大学生命科学学院，广东 广州 510631） 摘要：本实验通过应用豌豆根尖微核技术，以豌豆根尖细胞微核率作为参照标准，对三大品牌洗衣粉进行研究。结果表明，它们都豌豆根尖细胞有较强的诱变效应。并且在一定浓度洗衣粉溶液范围内，微核率随浓度增长，但随着处理液浓度的增加到一定程度豌豆根尖细胞微核率反而减少甚至低于对照组。 关键词：洗衣粉,豌豆根尖,微核 目前，豌豆根尖细胞微核测定监测淡水污染物和检测化学诱变剂的研究已列入国家生物监测技术规范(水环境部分)，并推广应用于大气、废水、土壤等的致突变活性检测[1].而检测洗衣粉毒性的报道较少。虽然排放到江河中的洗衣粉残剂量很少，对水环境及动、植物不能产生立即影响，但长期被生物体吸收，会产生持续的慢性危害 [2]。鉴于此，本文以市面上较为常见的几种洗衣粉为研究对象，利用豌豆根尖细胞微核技术偿试评价洗衣粉对生物体的危害，以期对洗衣粉的遗传安全性评价提供更可靠的资料。 1.材料和方法 1.1材料 1.1.1实验植物 豌豆 1.1.2试剂 广州宝洁有限公司生产的汰渍360全能洗衣粉，主要成分为全方位去污因子、抗污渍再沉积剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、衣物增艳剂、无磷水软剂、香料； 纳爱斯集团有限公司生产的雕牌超能洗衣粉，主要成分为阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、衣物增艳剂、水软化剂、香料； 广州立白企业集团有限公司生产的立白超洁洗衣粉，主要成分为污垢双向分离因子、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、涤彩因子、高效助洗剂、香料； 卡诺氏固定液、70％乙醇、1mol/L HCl溶液、改良品红、45％冰醋酸。 1.2方法 1.2.1洗衣粉浓度的配制 根据文献资料[2]，将洗衣粉溶液处理浓度为60、80、100、120 、140、160、180、200mg/L，蒸馏水对照。 1.2.2豌豆根尖的制备 选择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24h，待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养;当初生根长到1.5-2.5cm时备用[3]。 1.2.3待测洗衣粉处理根尖[4] 每一处理选取15粒生长良好，根长一致的种子，放入盛有待测的不同浓度的洗衣粉溶液的培养皿中，使被测液浸没根尖。处理12～18h。 1.2.4根尖恢复培养[4] 处理的种子用蒸馏水浸洗3次，每次2～3min，然后再放入铺有湿纱布的瓷盘中培养24h。 1.2.5根尖染色体标本制片 1.2.6显微镜观察并统计 在低倍镜下找到分生区细胞分散均匀、分裂象较多的部位，再转到高倍镜观察。每一处理观察3条根尖，每一根尖计算约1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，然后平均。即为该处理的微核千分率[4]。 1.2.7显微摄影 对于每个处理中观察到的典型微核进行显微摄影，以便更直观的展现实验结果。 2结果 表1.立白洗衣粉对豌豆细胞微核的浓度效应关系 品牌 0 mg/l 60 mg/l 80 mg/l 100 mg/l 120 mg/l 140 mg/l 160 mg/l 180 mg/l 200 mg/l 立白（‰) 4 11 14 18.5 13 10 6 5 2.5 汰渍（‰) 4 14.7 25 22.6 20 17 11.2 7 1.6 雕牌（‰) 4 5 7 8 9.2 14 10 6.4 4 2.1三大品牌的洗衣粉对豌豆根尖细胞微核率的影响结果如表1、图1所示。对不同浓度洗衣粉处理豌豆根尖产生的微核率与对照组相比，均明显增高。根据国际诱变剂、致癌剂防护委员会(ICPEMC)对遗传毒物所下的定义:任何一项致突变性试验，不论其遗传终点如何，只要得出阳性结果，即可认为该受试物属于致突变物[5]。由此表明三大品牌洗衣粉对豌豆根尖细胞有较强的诱变效应。 2.2从图1可以看出三大品牌的洗衣粉中，汰渍对豌豆根尖细胞微核率影响最大达到25‰，其次是立白，18.5‰。最低的是雕牌只有14‰ 2.3三大品牌的洗衣粉诱变豌豆根尖的微核剂量效应从表1中可以看出，无论是立白、汰渍，还是雕牌，在一定浓度范围内，随着处理液浓度的不断增加，豌豆根尖细胞微核率也逐步上升 ，但随着处理液浓度的增加到一定程度豌豆根尖细胞微核率反而减少甚至低于对照组，其原因可能是：低浓度时，化学物对根尖细胞的诱变作用占主导，但达到某一浓度限度时，其对细胞的毒性和生长抑制占了上风，毒性加强，细胞生长受到抑制，延迟细胞周期，致使细胞只经历了一次分裂，减少了微核形成的机率，使致突变作用无法表达或表达不全，表现出根尖细胞微核率下降;或是在中间代谢过程中生物转化的酶系统受到抑制，致使突变效应反而降低[6]。 3讨论 3.1三大品牌的洗衣粉中，不同品牌的洗衣粉有不同的检测结果