微生物生理学第七章gai.ppt

第 七 章 次级代谢（Secondary metabolism） 与 次级代谢产物（secondary metabolite） 第二节 次级代谢产物的合成与调节 次级代谢及次级代谢产物方面研究的困难 复杂性 多样性 可变性 局限性 代谢途径 代谢产物 菌株 研究手段 一、研究次级代谢途径的方法 刺激实验 同位素示踪实验 同位素稀释实验 菌丝洗涤实验 无细胞提取液实验 抑制实验 特异营养突变株方法 1、刺激实验 在抗生素的发酵过程中，添加某些被认为是某种抗生素合成的前体物质到培养基中，然后观察机体对该化合物的利用情况和相应抗生素的合成趋势，这样可大概了解这种化合物的同相应抗生素的合成关系。 2、同位素示踪技术 利用示踪原子14C、32P、15N、35S、3H等同位素标记的化合物作为培养基成分，然后分离与检查所研究的产物和中间体是否具有放射性，从而可以判断该化合物是否参与产物的生物合成，如果参与产物的合成，还可以再将产物分解，确定这种化合物是参与产物的哪个部分的合成。 3、同位素稀释实验 将全标记的营养物质（如C-葡萄糖）作C源培养抗生素产生菌，以合成全标记的抗生素，然后以这种全标记的抗生素的放射性强度作为对照；另外一组除加有全标记的营养物质外，还加有一种非标记的营养物质作C源，然后培养同样抗生素产生菌，因为产生菌不能识别标记与非标记化合物，如果非标记化合物也能被用来合成该种抗生素，那么合成的抗生素起放射性必然降低；如果非标记的化合物不参与抗生素的合成，则合成的抗生素的放射性强度不变。 4、菌丝洗涤实验 是将处于不同生长阶段的菌丝收集起来，通过洗涤将菌丝表面携带的原来的培养基洗去，然后放入抗生素合成的人工系统内，在一定条件下，继续观察被实验的化合物对该菌的代谢和抗生素合成的影响。 5、无细胞提取液实验 先收集菌体，破碎细胞使酶从胞内释放出来，再分别检查某些酶的活性，确定这些酶是否存在；然后再用每种酶做实验，确定它们对抗生素合成的影响，最后根据实验结果和生物化学知识确定抗生素生物合成的一般过程。 6、抑制实验 通过加入某种抑制剂以阻止抗生素合成过程中的某一酶促反应的进行，并设法分离和鉴定积累的产物，再试验该产物能否促进抗生素合成，这样有助于了解抗生素合成的一般过程。 7、特异营养突变株的方法 特异营养突变株 （idiotrophs，peculiertroph） 必须有特殊的营养料供应才能合成这个菌株特有产物的突变株。 共合成（Cosynthesis or cooperative biosynthesis） 涂布有供试菌的平板 菌A 菌B 菌A和菌B 中间所涂布的A、B菌的距离很近，如果如图所示，在A菌周围出现抑菌圈而B没有，同时单独的A和B均无抑菌圈，则说明A是转化者，而B时分泌者。 二、次级代谢产物的合成 1、大致过程 养料（C. N. S.P等） 前体（初级代谢产物） 次级代谢产物 聚合、装配、结构修饰 2、次级代谢物的前体 由糖酵解和TCA循环产生的C5、C4、C3、C2单元（戊糖、四碳糖、三碳糖、醋酸、草酰乙酸等）。 3、提高次级代谢合成中限制前体的方法 外源补充前体或衍生物，但所用前体必须 能够进入菌体 调节菌体代谢，促进前体合成 进行遗传操作，解除前体的合成的反馈调节 4、生物合成过程 单体聚合→结构修饰→不同组分的装配 5、青霉素（penicillin）和头孢菌素 （cephalosporin）的生物合成 （1）结构 * * * 第一节 初级代谢与次级代谢 一、次级代谢和次级代谢产物的概念 某些微生物在特定的条件下，由于初级代谢途径的某一过程失去控制，造成某些中间产物积累时，产生的一种代谢类型，它可以使中间体转变成一种对该机体生存并非必要的代谢产物，这种代谢类型称为次级代谢（ Secondary metabolism ）。 次级代谢过程的产物称为次级代谢产物。 二、初级代谢与次级代谢的差异 从存在上看，具有普遍性与特殊性的差异 从产物上看，具有必需性和非必需性的差异 从同生长的关系看，具有平行性和非平行性的差异 从代谢产物的类型几产生菌的生理作用看，具有同一 性和多样性的差别，明显性与非明显性的差别 从对环境条件变化的反应上看，具有稳定性和敏感性 的差异 从酶的专一性看，具有专一性和非专一性的差异 同质粒基因的关系看，具有非相关性和相关性的差异 三、初级代谢与次级代谢的关系 初级代谢是次级代谢的基础，它为次级 代谢产物合成提供前体和能量；而次级 代谢是初级代谢在特定条件下的继续和 发展，避免初级