生物化学_10 核酸合成.ppt

PCR仪的基本操作 第十章 思考题 1、比较DNA复制与RNA转录的异同。 2、比较DNA聚合酶、逆转录酶与RNA聚合酶催化作用的异同。 3、DNA复制的高度准确性是通过什么来实现的？ 4、RNA合成后的加工主要有哪些方式？ 5、何谓基因工程？简述其基本过程及应用价值 6、名词解释 中心法则　半保留复制 转录　反转录 有义链 反义链　　内含子　　外显子　冈崎片段 PCR RNA链的延伸图解 3′ 5′ RNA-DNA杂交螺旋 聚合酶的移动方向 新生RNA 复链 解链 有义链 模板链（反义链） 延长部位 （3）、转录的终止:   核心酶滑动到终止子时,ρ因子与核心酶结合，使核心酶停止滑动,释放出新合成的RNA。 依赖ρ因子的终止子。 不依赖ρ因子的终止子。 终止子的结构： 依赖ρ因子的终止子 不依赖ρ因子的终止子 E.coli trp 操纵子的不依赖ρ因子的终止子 不依赖ρ因子的终止作用： 依赖ρ因子的转录终止作用： 4、原核生物中转录后加工 （1）rRNA前体的加工 甲基化作用 专一核酸内切酶 30S前体 17S tRNA 25S 专一核酸外切酶 16S rRNA tRNA 23S rRNA 5S rRNA 专一核酸外切酶 rRNA前体的加工小结： （2）tRNA前体的转录后加工 a、切除tRNA前体两端多余的序列： 5’—端切除几到10个核苷酸。 b、末端添加：3’-端添加CCA序列。 c、修饰：形成稀有碱基如DH2 。 RNAaseP RNAaseF RNAaseP RNAaseF RNAaseD RNAaseD ACC ? ? ? 表示核酸内切酶的作用 表示核苷酸转移酶的作用 表示核酸外切酶的作用 表示异构化酶的作用 （2）tRNA前体的转录后加工 5、真核生物转录的特点： （1）真核生物的RNA聚合酶 α-鹅膏蕈碱 （2）真核生物基因的启动子 （3）真核细胞mRNA的加工： 5′ “帽子” PolyA 3′ 顺反子(cistron ) m7G-5′ppp-N-3 ′ p AAAAAAA-OH ? 加帽： 5′端接上一个“帽子”(CAP)结构； ? 加尾： 3′端添加PolyA“尾巴”,RNA末端腺苷酸转移酶催化； 剪接：剪去内含子(intron)，拼接外显子(exon)； 甲基化修饰： 酵母酪氨酸tRNA前体的加工 初级转录本 成熟tRNA （4）tRNA前体的加工： 加工 6 、真核生物和原核生物转录的差别 DNA 核 核糖体 新生蛋白质 真核生物 原核生物 mRNA前体 转运 加工 mRNA mRNA ? 真核生物中转录与翻译的时空分离 ? RNA聚合酶不相同 ? 启动子不同 ? 转录后RNA加工不同 噬菌体Q?的合成 A. 负链的合成 B. 正链的合成 病毒的正链 复制中间体 复制中间体 新合成的正链 新合成的负链 负链 二、RNA的复制 三、DNA和RNA合成的比较 ﹡﹡﹡ 第三节 核酸合成的抑制剂 ? 核苷酸合成抑制剂 氨基酸类似物 叶酸类似物 碱基和核苷酸类似物 嵌合剂 烷化剂 ? 与DNA模板结合的抑制剂 ? 作用于DNA聚合酶或RNA聚合酶的抑制剂 抗菌素:如利福平、曲张霉素 有机化合物：如磷羧基乙酸 第四节 基因工程简介 一、基因工程 二、聚合酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction, PCR） 一、基因工程简介 1、基因工程(亦称遗传工程)的概念 即利用DNA重组技术的方法，把DNA作为组件，在细胞外将一种外源DNA（目的基因）和载体DNA重新组合连接（重组），最后将重组体转入宿主细胞，使外源基因DNA在宿主细胞中，随细胞的繁殖而增殖（cloning，克隆），或最后得到表达，最终获得基因表达产物或改变生物原有的遗传性状。 2、基因工程的操作技术 3、基因工程的应用与前景 2、基因工程的 操作技术： Foreign DNA to be inserted Plasmid vector ligation Recombinant DNA molecule Introduction into host cells by transformation Host chromosome Selection for cells containing a recombinant DNA molecule Cloning + 1、体外基因重组 ? 目的基因的制备? 载体的构建： ? 目的基