利用大肠杆菌表达增强型绿色荧光蛋白EGFP.PDFVIP

分子生物学实验设计 池朋亮2013141241180 ，杜吉阳2013141241160 利用大肠杆菌表达增强型绿色荧光蛋白 EGFP （ ） 池朋亮，杜吉阳 摘要 绿色荧光蛋白是近年来在生物化学和细胞生物学中应用最广泛的标记性蛋白质之一。本实验 设计计划通过基因工程的方法，利用大肠杆菌表达系统表达增强型绿色荧光蛋白，首先 pEGFP-N3 和pET-28a(+) 质粒从含有相应质粒的的E.coli 中提取出来，然后利用Not I 和 BamH I T4 pET-28a-EGFP DN 双酶切法将两种质粒切开再利用 连接酶构建 质粒 ，将重组 质粒转入E.coli DH5α 中，最后通过IPTG 诱导E.coli 中的EGFP 基因表达，在紫外线的照 射下发出绿色荧光。 关键词：E.coli ；EGFP ；基因工程；实验设计。 目录 1 引言…………………………………………………………………………………………..……2 1.1 绿色荧光蛋白GFP 与pEGFP-N3 质粒……………………………………………….….……2 1.2 大肠杆菌表达系统…………………………………………………………………..….………3 1.3 实验流程……………………………………………………………………………..….………4 2 目的基因pEGFP-N3 质粒和表达载体pET-28a 质粒DN 的获取及检测…………….…4 2.1 实验原理………………………………………………………………………………...………5 2.2 实验目的…………………………………………………………………………….…..………5 2.3 实验材料……………………………………………………………………….………..………5 2.4 实验方法…………………………………………………………………………….……..……5 2.5 琼脂糖凝胶电泳检测………………………………………….………………………..………6 2.6 实验结果预测…………………………………………………………………………………...6 3pET-28a-EGFP 重组质粒的构建………………………………………………………….….…...7 3.1 实验原理……………………………………………………………………..…...….……….…7 3.2 实验目的……………………………………………………………………………...…………8 3.3 实验材料……………………………………………………………………………...…………8 3.4 实验方法……………………………………………………………………………...…………8 3.5 实验结果预测…………………………………………………………………….…….….……9 4 用CaCl2 制备感受态大肠杆菌和pET-28a-EGFP 重组质粒的转化及筛选……………….……9 4.1 实验原理………………………………………………………………………………...………9 4.2 实验目的……………………………………………………………………………….………10 4.3 实验材料……………………………………………………………………………….………10 4.4 实验步骤……………………………………………………………………………….………11 4.5 实验结果预测………………………………………………………………………….………11 5 用IPTG 诱导表达转入E.coli 中pET-28a-EGFP 重组基因…………………………………12 5.1 实验原理………………………………………………………………………….……………12 5.2 实验目的…………………………………………………………………………….…………12 5.3 实验用品…………………………………………………………………………….…………12 5.4 实验步骤…………………………………………………………………………….…………12 5.5 结果预测与讨论………………………………………………………………….……………13 7 参考文献…………………………………………………………………………………………13