碱裂解法提取质粒操作步骤开始操作去除蛋白质.pptVIP

目的 DNA片段 质粒 TA载体 连接 重组质粒 目的 DNA 转化 无质粒的E.Coli 死亡 有质粒的E.Coli 存活 含抗生素培养基中生长 重组质粒的鉴定 PCR 开始上课时介绍2-3min 平板筛选 上次实验小结 1、观察自己组的实验结果：转化平板 *培养板在37C 培养12-16h 卫星菌：培养时间过长 2、实验中的难点 *制备效率高的感受态细胞 o 小量制备质粒和电泳分析 实验四 开始实验操作前：本次实验介绍10-15min 质粒…… 质粒载体 是存在于细菌染色体外的小型闭合环状双链DNA分子，在宿主细胞内可独立自主复制并赋予宿主细胞一定的遗传性状 筛选标记 MCS（多克隆位点） 复制原点 质粒 1)培养细菌使质粒扩增； 2)收集裂解细菌； 3)分离纯化质粒DNA。 质粒提取原理： 质粒提取有多种方法，但都包含有3个基本步骤： √去除蛋白质 √去除基因组DNA √去除RNA *酚-氯仿抽提法 *RNase消化 ？？？ 质粒DNA与基因组DNA的区别 大肠杆菌遗传物质 1、部位不同： 2、大小不同： 质粒分子量较小，大小只有普通细菌染色体DNA的百分之一。 基因组DNA分子量较大，细菌基因组约含3000个基因，5?106 bp。 基因组DNA容易断裂线性化 碱裂解法提取质粒的原理 原理： 1、强碱和SDS