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[小学教育]第1章 核酸-2012
图 双脱氧终止法-1 图 双脱氧终止法-2 图 双脱氧终止法-3 2.化学裂解法（Maxam-Gilbert 法） 原理： 利用特异性的化学裂解法，制备出具有同一标记末端，而另一端是长度只差一个核苷酸的片段群，然后将此片段群在能够分辨长度只差一个核苷酸DNA片段的PAGE上分离。 1.目的DNA的制备。 2.单侧末端标记待测DNA片段。 3. 碱基的特异性修饰及化学降解。 主要步骤： 化学降解G反应模式图 4.聚丙烯酰胺凝胶电泳。 5.阅读分析结果。 硫酸二甲酯特异切割：G 甲酸特异切割：G和A 肼在NaCl条件下切割：C 肼在无?NaCl条件下切割：T和C 32P *ACTTCGACAA 硫酸二甲酯（G）： *ACTTC 甲酸（G、A）： *P *ACTTC *ACTTCG *ACTTCGAC *ACTTCGACA 32P *ACTTCGACAA 肼（NaCl）（C）： *A *ACTT *ACTTCGA 肼（无NaCl）（C、T）： *A *AC *ACT *ACTT *ACTTCGA 图 化学法测定DNA一级结构-1 图 化学法测定DNA一级结构-2 采用4种带有不同琥珀酰荧光素标记的终止物ddNTPs 同一个反应管中进行末端终止测序反应 变性聚丙烯酰胺凝胶的同一泳道中进行电泳检测 对DNA序列的识读在电泳过程中完成(4种荧光素,4种颜色) 3. DNA序列分析的自动化(双脱氧终止法) DNA序列分析仪：四色荧光基团标记的dNTP: A: green T: red. C: blue G: yellow 一、名词解释 生物化学 Chargaff定律 核酸的变性与复性 增色效应与减色效应 Tm（熔解温度 ） 二、符号解释 DNA RNA m5C DHU ? ATP dNTP NTP cAMP cGMP 三、写出下列物质的结构式 ATP cAMP DHU 本章练习题: 三、简述DNA和RNA在组分、分布、结构及功能上的异同。 四、弄清碱基、核苷、核苷酸和核酸在分子结构上的关系。 五、DNA双螺旋结构的基本内容。 六、简述三种RNA的特点（种类、含量、结构特点、功能）。 * polyA与mRNA半寿期有关，新合成的mRNA，其polyA较长；而衰老的mRNA，其polyA较短。 polyA功能： PolyA是mRNA由核进入胞质所必需的形式。 PolyA大大提高mRNA在胞质中的稳定性。 5,m 7G－ 5, ppp 5, －NmP 帽子的功能： ★可抵抗5’核酸外切酶降解mRNA。 ★ 可为核糖体提供识别位点，使mRNA很快与核糖体结合，促进蛋白质合成起始复合物的形成。 第四节 核酸的理化性质 一、核酸的水解 1、酸水解 糖苷键和磷酸酯键都能被酸水解，但糖苷键比磷酸酯键更易被酸水解 2.碱水解 室温条件下，0.1mol/L NaOH可将RNA完全水解，得到2’-或3’-磷酸核苷的混合物。? 在相同条件下，DNA不被水解。这是因为RNA中C’2-OH的存在，促进了磷酸酯键的水解。 DNA、RNA水解难易程度的不同具有极为重要的生理意义： DNA稳定，保留和传递遗传信息。 RNA是DNA的信使，完
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