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专题七 基因工程(含PCR技术)
试题1 基因工程
例 题
基因工程又称为DNA重组技术,回答相关问题:(15分/10min)
(1)在基因工程中,获取目的基因主要有两大途径,即__________和从___________中分离。
(2)利用某植物的成熟叶片为材料,同时构建cDNA文库和基因组文库,两个文库相比,cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少,其原因是___________。
(3)在基因表达载体中,启动子是______聚合酶识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞,最常用的原核生物是__________。
(4)将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时,常用的携带目的基因的金属颗粒有______和______颗粒。
【解析】(1)获取目的基因主要有两大途径,即人工合成和从自然界已有的物种中分离。
(2)植物的成熟叶片中基因选择性表达,因此由所有RNA逆转录形成的cDNA文库中只含有叶细胞已转录(或已表达)的基因,而基因组文库中含有该植物的全部基因。
(3)在基因表达载体中,启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位。采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞,由于易于培养,最常选用大肠杆菌(或细菌)。
(4)将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时,常用的携带目的基因的金属颗粒有金粉 和钨粉颗粒。
【答案】(1)人工合成 生物材料(每空2分,共4分,其他合理答案可酌情给分) (2)cDNA文库中只含有叶细胞已转录(或已表达)的基因,而基因组文库中含有该植物的全部基因(5分,其他合理答案可酌情给分)(3)RNA(2分) 大肠杆菌(或答细菌)(2分)(4)金粉 钨粉(每空1分,共2分)
试题2 PCR技术
例 题
PCR是一种DNA体外扩增技术。 1988年,PCR仪问世,并被广泛应用于基因扩增和DNA序列测定。如图是PCR技术示意图,请回答下列问题:(11分/6min)
①标准的PCR过程一般分为 、 、 三大步骤。
②引物是此过程中必须加入的物质,从化学本质上说,引物是一小段 。
③将双链DNA ______________ ,使之变性,从而导致 。
④引物延伸需提供 作为原料。
【解析】①标准的PCR过程一般分为高温变性、低温复性、中温延伸三大步骤.
②引物是一小段单链DNA或RNA。
③高温变性时,需要将双链DNA加热到95℃,使之变性,从而导致双链DNA分离成两条单链。
④中温延伸是需要以四种脱氧核苷酸为原料。
【答案】①变性 复性 延伸 ②单链DNA或RNA ③加热到95℃ 双链DNA分离成两条单链
④四种脱氧核苷酸
基础回归
1.基因工程的主干知识
(1)目的基因的获取eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(①从基因文库中获取,②利用PCR技术扩增,③用化学方法直接人工合成))
(2)基因表达载体的构建(目的基因+启动子+终止子+标记基因)。
(3)将目的基因导入受体细胞
导入植物:农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法;
导入动物:显微注射技术;
导入微生物细胞:感受态细胞法(用Ca2+处理)。
(4)目的基因的检测与鉴定
插入检测:DNA分子杂交;
转录检测:DNA—RNA分子杂交;
翻译检测:抗原—抗体杂交;
个体水平检测:抗性接种实验。
2.基因表达载体的构建过程
3.PCR反应的过程
规范训练
非选择题(45分/45min)
1.α1﹣抗胰蛋白酶是肝脏产生的一种糖蛋白,缺乏会引起肺气肿。某公司成功研制出转基因羊,进入泌乳期后,其乳汁中含有人类的α1﹣抗胰蛋白酶,用于治疗肺气肿。问答下列问题:
(1)为获取目的基因,需要在肝细胞中提取 ,通过反转录产生cDNA,再通过 技术进行快速扩增。
(2)将α1﹣抗胰蛋白酶基因与乳腺蛋白基因的 等调控组件重组在一起,构建基因表达载体,然后通过 技术,导入羊的受精卵中。
(3)受精卵通过早期胚胎培养,一般发育到 阶段,通过胚胎移植到受体子宫孕育。为选育出能泌乳的雌羊,移植前须从胚胎的 部位取样,做DNA分析鉴定性别。
(4)α1﹣抗胰蛋白酶是一种结构较复杂的糖蛋白,因此用上述方法生产,相对传统的转基因大肠杆菌生产,优势在于 。
【解析】(1)α1﹣抗胰蛋白酶基因在肝细胞中表达,所以可以在肝细胞中提取mRNA,反转录产生相应cDNA,再通过PCR扩增。
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