酶的最适pH测定.docVIP

唾液淀粉酶最适pH值测定 作者：谭继欢 学号：201140143 摘要：生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸，前者是机体内催化各种代谢反应最重要的催化剂。酶分子中的许多极性基团。在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才最容易同底物结合或具有最大的催化活性。许多具有可解离基团的底物和辅酶的荷电状态也受pH改变的影响，从而影响酶对它们的亲和力。此外，PH还可以影响酶活性中心的空间构象，从而影响酶的活性。因此，pH的改变对酶的催化作用影响很大。 酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适PH。测定酶的最适pH值，是进一步了解酶生物学活性的基础。 关键词：淀粉酶 最适ph 吸光度 前言：酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义，研究酶可以很好应用酶的各种特性，在各种领域广泛应用。 影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。 PH值对酶反应活力的影响： 1、 酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶的活力丧失，这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的，对可逆的来说，改变PH值后可使活力恢复。 2、 酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态，使得底物不能分解成产物。 3、 酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态，使得底物不能和它结合。 4、 酸或碱影响底物的离解状态，或使底物不能和酶结合。 由于上述种种原因，各种酶的作用都有一个最适合的PH值范围。 实验原理： 本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受PH影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶。淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及少量葡萄糖（黄色）。用分光光度计测量出各溶液在660nm处的吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适pH值。 实验材料 仪器： 试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37℃恒温水箱、722G可见分光光度计、吸量管（1ml 5ml 10ml） 试剂药品：0.4g/L缓冲淀粉溶液、碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液pH 0.2mol/L Na2HPO4 (ml) 0.2mol/L NaH2PO4 (ml) 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 0.615 0.925 1.325 1.875 2.450 3.050 3.600 4.385 4.075 3.675 3.125 2.550 1.950 1.400 注：应用pH值试纸来确定所配pH 2、唾液的获取 先漱口1～2次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。 3、淀粉用量的确定 试管号 1 2 3 空白 7.0pH缓冲液(ml) 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉(ml) 0.1 0.2 0.3 - 唾液（稀释10倍） 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液 H2O(ml) 5.9 5.8 5.7 6 混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其用量 + ++ +++ ++++ “+”表示颜色的深度 实验结果：体积为0.1ml的淀粉溶液为最适用量。 4、 酶液稀释倍数确定 稀释倍数 5 10 15 20 25 30 酶液（mL） 1 0.5 0.4 0.25 0.2 0.2 H2O（mL） 4 4.5 5.6 4.75 4.8 5.8 稀释倍数 5 10 15 20 25 30 空白 7.0pH缓冲液(ml) 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 酶液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 - 混匀，37℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液 H2O(ml) 6 6 6 6 6 6 6 混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其稀释倍数 ++ + ++ ++ +++ +++ ++++ “+”表示颜色的深度 实验结果：稀释10倍的酶液为最适稀释倍数。 5、 最适pH确定 pH 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 pH缓冲液 （ml） 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 稀释10倍