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PCR_RFLP技术应用于鉴定美洲斑潜蝇和番茄斑潜蝇的初步研究
18 V l. 18
2002 12 W UYI SCIENCE JOURNAL Dec. 2002
: 1001-4276-( 2002) 01-0060-05
PCR- RFLP
, ,
( 华南农业大学昆虫生态研究室, 广州510642)
P CR- RFLP , (L ir iomyz a sat iv ae) (L ir iomy z a br y on i-
) , 18 5. 8 1 ,
ae DNA S S IT S
PCR ,
, , IT S1, PCR- RFLP,
: Q953: A
1
300 , , ,
14 ( , 1995) ,
: (L iriomy z a sativ ae) , ( L iriomy z a bry oniae) , (L iri-
omyz a h uidobrens is) , (L iriomy z a trif olii) ,
,
,
, ,
,
, -
RAPD PCR RFLP
AFLPDNA , PCR- RFLP
rDNA
18S5. 8S 28S , , ;
1( 1) 2( 2) , ,
ITS ITS
; 1 18 5. 8 ,
ITS S S rDNA
, DNA ,
, ,
: 2002- 06- 10
18 : PCR- RFLP 6 1
18 5. 8 ,
S S
DNA ITS1 , 5 4
( Afa Masp HaeMb Alu ) PCR ITS1
, PCR- RFLP
2
2. 1
2. 1. 1 虫源 ,
95%DNA
2. 1. 2 试剂 ( ) , EDTA
, SDS Serva ; dNTPsTaq DNA ;
( ) 100 ,
GeneRuler tm bp DNA marker
( )
18SF : 5GAAGTAAAAGT CGTAACAAGG3
5. 8SR : 5GT CCT GCAGT T CACACGAT G3
2. 2
2. 2. 1 总DNA 的抽提
DNA ( , ) : 1 , , T E ;
, ,
T E
, 30ul ( 100mM Tris- cl , 1mM EDT A, 25 m M Nacl, 200ug/ ml
Pr teinase K ) , tip , 30ul tip , 60ul
56 2 , 95 45 K ,pm/ min
30 , PCR DNA , - 20
2. 2. 2 PCR( P lymerase chain reacti n) 扩增ITS1 基因片段 25ul,
13. 5ul ddH2O2. 5ul 10buffer1. 5ul Mg2+ ( 25mM) 2ul dNT Ps( 2. 5mM)
18SF 5. 8SF ( 4
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