第十七章混合斑检验.pptVIP

精液和阴道液都是人体分泌液，均存在可溶性ABH血型物质和部分血清型和酶型蛋白，可供分型检测。 从精子细胞和阴道上皮细胞提取DNA，可以获得 DNA多态性信息。 从混合斑测出的遗传标记型别是精液与阴道液遗传标记的总和。 经过与参比检材的对照，其中除被害人以外的遗传标记可以认为是来源于犯罪嫌疑人。 应取受害人和犯罪嫌疑人的血液、唾液检材做参比样本 已婚的被害人，须提取其丈夫的血样和唾液样同时检测 传统的血型标记在混合斑个体识别鉴定具有实用价值，主要有两类方法： 一类是对比推断法：简单易行，信息量有限 另一类是检测精液与阴道液的特有遗传标记成分 目前广泛采用STR基因座分型技术：信息量大，常规技术 被害人没有的血型物质可以认为是来自精斑 分泌型和非分泌型个体的体液中血型物质的含量无绝对的界线 ，凝集抑制的级数反映分泌型的强弱。 所有的分泌型个体的体液中都可以检测出H物质，只是O型分泌型的H物质含量最高，而A型、B型和AB型个体的A和B物质含量明显高于H。 例：A型物质仅抑制2级。案件的被害人为A型，则提示混合斑的H物质是来自精斑。 能否检测出混合斑各个体的血型物质，还受混合比例等影响因素。在检测中注意多处取材，分析所有的检测结果，才有可能准确推定精液的血型。 人类精浆水溶性ABH物质存在于α2精浆糖蛋白中。 α2一SGP来源于精囊腺，抗- SGP血清是用纯化后的α2－SGP，免疫动物获得，抗血清含有两类抗体： 一类为抗糖侧链抗体，能与A、B、H等血型物质发生反应； 另一类为抗-α2－SGP蛋白抗体，能与α2－SGP发生反应。 用A、B、O型压积红细胞和AB型人血清吸收粗制抗血清后，抗－α2－SGP血清中的抗糖侧链抗体被吸收除去，仅留抗－α2－SGP蛋白抗体。 共同抗原，交叉反应：不宜用于精液与唾液或精液与乳汁混合斑的 ABO血型测定。 （三）DNA分析 常染色体分析： 关键---获得纯净的精子DNA-----差异裂解或二步抽提法 原理：精子细胞的表面蛋白含有大量的二硫键，可以抵抗去垢剂SDS核蛋白酶K的消化，而其他组织的细胞膜则可以被这两种物质消化。 方法：第一步：检材+1%SDS+100ug/ml蛋白酶K---37度2~3h 500r/min离心15min、去上清，精子留在沉淀物中。 第二步：+40Mm/L DTT+1%SDS+100ug/ml蛋白酶K---- 注意：消化条件选择----主要是第一步消化时间 消化不完全----当阴道上皮细胞过多，不能使两者彻底分离 过渡消化----可能消化一部分精子细胞，导致精子DNA减少 实际操作前，应进行涂片检查，根据精子和阴道上皮 细胞的比例，对消化时间、温度、试剂的浓度等进行适当的调整 提取方法选择----采用有机溶剂的方法比较好。 酚-氯仿能够去掉混合斑中的精浆蛋白，阴道分泌液、细菌污染严重的的,用有机溶剂提取后,用5%clekex100提1次。 Y染色体DNA分析： 1 男性特有，Y-STR检测不受女性成分的干扰，不需分离精液成分和阴道液成分，两者比例为1/100--2000时仍可正确检出精子DNA，避免了两步消化过程，及操作过程中精子DNA的损失，提高了检出阳性率。 2 精子细胞比体细胞更稳定，保存25年的阴道式子Y-STR获得成功 3 轮奸案----可以推测犯罪嫌疑人的数目。 Amelogenin基因座：可判定检材的性别。 Y峰出现说明检材含有男性成分，X和Y峰面积 信息可用于判断是否混合斑，X峰面积明显大于 Y峰，可以认为是男女混合血痕。 Y-STR基因座分析：能证明混合斑有男性成 分，还能确定混合斑中男性个体数。 在做混合斑的个人识别时，应将性别位 点，Y-STR与常染色体STR结合应用。 * * * * 第十七章 混合斑检验 第一节 概述 由不同个体的同一种体液，分泌液混合而成，最常见为混合血痕。 由不同个体的不同体液，分泌液混合而成，最常见为精液与阴道分泌液组成的混合斑。 受混合成分种类、混合个体数、以及不同个体来源的成分所占比例等因素的影响，检测结果分析较单一斑痕要复杂。 混合斑 是指两名或两名以上个体的体液、分 泌液混合形成的斑痕。可以分成两大类： 混合斑常出现在下列情况： 性犯