[生物学]DNA复制.ppt

第二章 DNA的生物合成(复制) 第一节复制的基本规律 一、半保留复制的定义 1、子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全重新合成，这种复制方式称为半保留复制。 二、复制方向 聚合酶延伸方向：5’→3’ 复制叉移动的方向：双向或单向复制 三、复制起点 复制有固定的起点，原核生物单个起点，真核生物多个起点。 四、复制子 复制体：复制叉处的许多酶和蛋白组成的复合体，协同动作合成DNA 复制子（Replicon）；又称复制单位 或复制元， DNA中含有一定复制起点和复制终点的复制单位 五、复制的半不连续性 1、DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续复制 前导链：顺着解链方向生成的子链 后随链：不能顺着解链方向连续延长的链，形成冈崎片段，再连接形成完整的链。 2．复制完成后，不连续片段经过去除引物，填补引物留下的空隙，连成完整的DNA链。 第二节与DNA复制有关的物质 一.DNA聚合酶: ●以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物 ●反应需要有模板的指导 ●反应需要有3?-OH存在 ●DNA链的合成方向为5 ? ? 3 ? 原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌） 这些亚基的主要作用 （1）α、ε和θ三种亚基构成核心酶 (2)2个半圆形β亚基形成一个圆环，套在DNA上，形成滑卡式结构。 (3)γ亚基与δ、δ，χ、ψ等亚基结合而成复合体称为γ复合体。γ复合体是装卡器。 (4)τ亚基的作用是使核心酶二聚化。 二.引物合成酶（引发酶）：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。 三、 DNA连接酶（DNA Ligase） 切刻的 3’－OH 和 5’－P 相邻， 切刻各自碱基处于配对状态 需要能量 原核（ATP、NAD） 真核（ATP） 用途： 复制过程中，5’ 端RNA引物被置换后切刻的连接，修复、重组 四、DNA 拓扑异构酶(DNA Topisomerase)： 拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。 拓扑异构酶Π：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子。 五、DNA 解螺旋酶 /解链酶（DNA helicase) 通过水解ATP获得能量。 DnaB为解旋酶 六、单链结合蛋白(SSB-single-strand binding protein)： 第三节DNA生物合成过程 一、原核生物DNA生物合成过程 （一）复制的起始 1.DNA解链 (1)大肠杆菌上有一个固定的复制起始点，称为oriC。 (2)oriC上有两个系列的重复单位：3×13bp，4×9bp富含AT 双链解开、复制起始 (3)解链过程主要由DnaA、DnaB、DnaC三种蛋白质共同参与。 2．引发体和引物 (1)引发体：引物酶(即DnaG蛋白)和DNA的起始复制区域及其它蛋白质构成的复合结构称为引发体。 (2)RNA引物由引物酶合成意义：减少致死突变，DNA合成最初几个核苷酸正确性远比其后低，引物RNA随后被降解，减少复制错误。 （二）复制的延长 由于随后链合成的方向与复制叉前进的方向相反，随后链模板需要在DNA聚合酶上折绕180°，使得RNA引物的3’端靠近DNA聚合酶Ⅲ的一个催化位点，才能保证随后链与前导链的合成方向都与复制叉的进行方向一致。 当随后链延伸大约1000-2000碱基时，会遇到位于前方的另一个冈崎片段的RNA引物5’端，随后链将连同模板一起脱离DNA聚合酶，空出的DNA聚合酶Ⅲ催化位点可以开始接纳下一个有RNA引物的随 后链模板，开始另一段随后链的合成。 (三)复制的终止 1．大肠杆菌基因组复制的终止区域存在多种终止序列，这些终止序列分列于终止区域中心(所谓陷阱区)的两侧，并分别与特异性的Tus蛋白结合。 二、真核生物的DNA生物合成 （一）真核生物 DNA聚合酶 DNA-polα:与引发酶结合，延长随从链。 DNA-polβ：修复 DNA-polγ：在线粒体内 DNA-polδ：延长领头链 DNA-polε:较读、修复填补缺口 （二）复制终止和端粒酶 1．端粒 是真核生物染色体末端的结构。 端粒在维持DNA完整性，决定细胞寿命。 2、端粒结构： 共同特点是简单串联重复序列，富含G。 与特定蛋白形成复合物。 可形成四链结构。 3．端粒复制 端粒酶：该酶兼有提供RNA模板和催化反转录的功能。 端粒酶活性：在细胞永生化和肿瘤增殖维持中起作用。原癌蛋白、雌激素因子可激活端粒酶。 （三）真核生物染色体DNA复制的调控 3个水平调控： 细胞生活周期水平调控：受复制许可因子调控。 染色体