[研究生入学考试]5 基因结构与表达分析的基本策略.pptVIP

第七章 基因结构与表达分析的基本策略 第一节 DNA序列分析 一、双脱氧链末端终止法 一、双脱氧链末端终止法 （dideoxy chain termination） 二、DNA自动化序列分析 DNA自动测序步骤 4种带有不同荧光染料标记的终止物ddNTPs 平台效应（plateau effect）： PCR经过一定数量的循环后，DNA片段不再呈指数累积，而是进入平台期。 二、耐热DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶 从嗜热水生菌(Thermus aquatics YT-1) 株中直接分离出来。 Taq DNA聚合酶特性 ● 5′→3′聚合酶活性； ● 5′→3′外切酶活性； ● 逆转录酶活性； ● 较弱的非模板依赖性； ● 缺乏3′→5′外切酶活性。 4.其它原则: ① 引物长度: 10～30 nt PCR引物用量计算 四、PCR条件的优化 (一) Taq DNA聚合酶浓度： 1.0～2.5 U/100 μl反应液 五、PCR改进技术 2. 实时荧光定量PCR 3. 反向PCR（inverse PCR） 4. Alu-PCR 7. 不对称PCR（asymmetric PCR） 8. cDNA末端快速扩增技术 第三节 核酸分子杂交 （Nucleic Acid Hybrid