两种纳米金标记p53抗体探针的制备表征和性质.pdf

中国医药生物技术 2010 年 6 月第 5 卷第 3 期 Chin Med Biotechnol, June 2010, Vol. 5, No. 3 171 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.03.002 ·论著· 两种纳米金标记 p53 抗体探针的制备、 表征和性质研究 黄云艳，贾春平，刘美英，金庆辉，赵建龙，赵林川 【摘要】 值的肿瘤预后因子。 目的 制备 IgG-Au-HRP 和 IgG-Au-DNA-HRP 两种纳米 传统的 p53 蛋白检测方法有放射免疫分析 金标记 p53 抗体探针，并对其进行生物学特征表征和性质 （RIA ）和酶联免疫分析（ELISA ）。RIA 方法具有 研究。 放射污染性，不易在临床推广；ELISA 检测法因操 方法 利用纳米金粒子与蛋白质非共价吸附和与巯基修 作程序复杂，所需时间较长，尤其在早期肿瘤标志 饰的寡核苷酸以 Au-S 键共价结合的特点，将辣根过氧化 物、神经性肽等微量蛋白的检测上，缺乏足够的灵 物酶（HRP ）直接或通过寡核苷酸链间接标记在纳米金 敏度，限制了其在临床上的应用[3] 。因此，对于早 表面，制备两种多功能纳米金生物探针（IgG-Au-HRP 和 期癌症的肿瘤标记物的检测方法需要进一步改进， IgG-Au-DNA-HRP 探针）；应用透射电镜、紫外-可见光光 以提高检测灵敏度。 谱等对纳米金探针性能进行表征，对纳米金探针表面 HRP 纳米金颗粒具有纳米材料所特有的三大效应： 酶活性进行分析，并通过酶免疫标记技术（enzyme linked 表面效应、小尺寸效应和宏观量子隧道效应，日益 immuncsorbent assay ，ELISA ）优化探针制备条件和比较两 受到人们的关注[4] 。自 1971 年 Faulk 和 Taylor[5] 种探针标记效率。 将兔抗沙门菌抗血清与纳米金结合，用直接免疫细 结果 ①两种新型探针具有良好的单分散性，大小均一，粒 胞化学技术检测表面抗原后，纳米金做为一种免 疫标记技术得到了更为迅速和广泛的发展。最近报 径约 10 nm ；②p53 蛋白检测效果对 IgG-Au-HRP 和 道的基于纳米金和微型磁珠的 BCA 扩增技术 IgG-Au-DNA-HRP 探针制备条件优化结果表明：制备 IgG-Au-HRP 探针时，HRP 分子和 p53 抗体的最佳比例为 （Bio-Bar code assay ）是以巯基寡核苷酸和蛋白连 接纳米金形成纳米金生物探针，建立的高灵敏度检 10:1；制备 IgG-Au-DNA-HRP 探针时，DNA 和 p53 抗体 的最佳比例为 2.5 :1；③HRP 分子定量检测显示：一个 测蛋白的新方法[6-10] 。另外，标有辣根过氧化物酶 IgG-Au-HRP 探针可标记 HRP 数量约 11 个，IgG-Au- （horseradish peroxidase ，HRP ）的抗体 IgG 标记 DNA-HRP 探针可标记 HRP 数量为 20 个；④两种探针结 到纳米金颗粒表面，根据电化学方法检测血清蛋白 含量，其中 HRP 作为信号扩增作用，可以促进不 合 ELISA 法初步检测 p53 蛋白判定 IgG-Au-DNA-HRP 同的发光体进行发光并产生可见的信号[11] 。 探针比 IgG-Au-HRP 探针检测蛋白灵敏度高。 结合以上研究，在本研