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中心实验室实验指南 自动切胶仪 作者：郭丹 修订日期：2014-9- 18 【目的及应用】： Ettan 自动切点仪可以与多种凝胶染色方式兼容，包括考马斯亮蓝染色，银染和SYPRO 荧 光染色等。通过识别两个参照标志物的坐标位置（X 和 Y ）来确定出胶内蛋白点的精确坐标， 误差不超过1 毫米，一个循环可以切下9600 个蛋白胶粒。 【试剂及设备】： 1.1 设备：Ettan Spot Picker 自动切胶仪 【实验步骤】： 1.仪器开机系统设置 1.1 仪器开机：按下仪器背部的总开关，系统电源即被接通，进入主界面启动Ettan Spot Picker 控制软件。要求仪器复位的对话框将会出现。点击“OK” 。 1.2 系统设置：选择“System ：System Setup” 编号 ：PUMCHCL-P-3-Q06-1 北京协和医院中心实验室 更新日期：2014/09/18 第1 页,共6 页 中心实验室实验指南 推荐在设置任何系统位置前，都先使用“Initialize Instrument”“Go to Home”按钮。“System Setup”屏中可以允许用户设置： (1) Rinse Station 清洗站的位置（XYZ 轴，无须每次设置）； (2) 切胶平面的Pick 头高度（Z 轴，必须每次设置）； (3) 96 孔板A1 孔的位置（XYZ 轴，无须每次设置）； (4) 切胶时所需要的一些参数设置（无须每次设置）。 注：在任何情况下，用户都可以通过点击“Cancel”按钮退出“System Setup”程序。如果选择了 “Cancel”，则对“System Setup”进行的所有修改将全部丢失。如果需要保存修改设置，则点击 “Save and Exit” 。 1.3 系统灌注 将缓冲管放在适合切胶的溶液中。在载入切胶列表后，软件将会告知用户切下所有蛋白点 所需要的溶液提及。推荐使用双蒸水或者合适的清洗/脱色液作为切胶时的系统缓冲液。 注意：在灌注系统前必须确保系统设置中清洗站的位置已经被正确设置 （1） 选择“Tools: Prime Syringe” 。 （2 ） 在“Prime Syringe” 中，输入清洗次数（推荐为5-10 次），按“Prime”键。 （3 ） 可以使用“ Stop”键中止清洗。 （4 ） 清洗结束后，点击“Exit” 编号 ：PUMCHCL-P-3-Q06-1 北京协和医院中心实验室 更新日期：2014/09/18 第2 页,共6 页 中心实验室实验指南 2. 放置凝胶 (1) 将凝胶盘放于Ettan Spot Picker 。 (2) 将凝胶放于凝胶盘上，并用少量液体（例如：固定/储存液或双蒸水）覆盖凝胶至约 2 毫米 厚。如果待切蛋白点数量较多，则需要更多体积的液体以补偿挥发造成的损失。为了避免 产生气泡，放置凝胶前需要在胶盘内加入少量液体，然后将凝胶从一侧逐渐倾斜，直至放 入胶盘内。 (3) 放置凝胶时，要使参照标志位于胶盘中央的平行线内。注意不要使参照标志与平行线相交 或接触，以免影响到参照标志的识别。 (4) 将凝胶固定器装在胶盘内的缝隙中，是用凝胶固定器稳固的固定凝胶，用手指转动螺丝将 其固定。 注意：对于面积较大的凝胶，凝胶固定器需要在放置凝胶前就固定在胶盘上。否则，凝胶 可能被凝胶固定器破坏。 3. 切胶操作 3.1 载入切点列表 (1) 在“Load Pick List”窗口中，选择使用的参照标志类型（黑色/ 白色），点击“Load Pick List” 。 (2) 浏览寻找切点列表。 (3) 选中切点列表，点击“Open” 。 (4) 如果使用ImageScanner 对凝胶进行扫描，检查“Use Correction”框。在“Scanner