脱氧核苷酸结构.pptVIP

* DNA和蛋白质技术 一、基础知识 （一）DNA分子的结构 C、H、O、N、P 1、组成元素 脱氧核苷酸 2、基本单位 3、脱氧核苷酸结构 脱氧核苷酸 磷酸 脱氧核糖 含氮碱基 腺嘌呤（A） 鸟嘌呤（G） 胞嘧啶（C） 胸腺嘧啶（T） 一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第三位碳原子上的“－OH”之间失去一分子水，形成磷酸二酯键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3′和5′碳原子之间形成磷酸二酯键。四种脱氧核苷酸通过3′、5′-磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。 4、脱氧核苷酸链的形成 通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3′端，而磷酸基团的末端称为5′端 脱氧核苷酸结构式 O O P O HO 碱基 O OH O O P O HO OH 碱基 5’ 3’ 3’ 5’ 碱基 脱氧核糖 磷酸基团 碱基 脱氧核糖 碱基 脱氧核糖 5’ 3’ 多脱氧核苷酸链结构简图 5、DNA分子的双螺旋结构 ① DNA分子是由两条反向平行的（即一条链为3′－5′，另一条链为5′－3′）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则双螺旋结构。 ②脱氧核糖与磷酸交替连结，排列在外侧，构成基本骨架；碱基排列在链的内侧。 ③两条链上的碱基通过氢键连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤一定同胞嘧啶配对，即遵循碱基互补配对原则。 （二）DNA的复制 2、时期 有丝分裂间期减数第一次分裂前的间期 3、场所 细胞核（主）、线粒体、叶绿体 4、模板 DNA母链 1、概念 由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程 5、原材料 脱氧核苷酸 6、基本条件 模板、原料、 ATP 、酶 7、复制过程 ① DNA的解旋 亲代DNA分子利用细胞提供的能量在解旋酶的作用下氢键断裂，部分双螺旋链解旋为两条平行的双链 ② RNA引物的合成 以单股DNA为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物 ③ DNA的生成 以单股的DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下，在RNA引物的末端由5’端－3’端合成DNA。 ④ DNA片断的连接 在DNA连接酶的作用下将多个片断连接起来。形成一条完整的新的DNA链。新链与旧链构成新的DNA 边解旋边复制、半保留复制 8、复制特点 9、精确复制的原因 10、复制的意义 DNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传信息的连续性 ①规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板②碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行 （三）PCR(多聚酶链式反应） 1、 DNA聚合酶特性 不能从头合成DNA，只能从DNA的3′端开始延伸DNA链，因此， DNA复制需要引物 2、 DNA聚合酶作用过程 当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后， DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链， DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸 复制方向示意图 3、 PCR原理 ①在80-100℃的温度，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。 ②当温度缓慢降低至50℃左右，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链，这个过程称为复性。 ③当温度上升至72℃左右，溶液中的4种脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，在DNA聚合酶的作用下，按碱基互补配对的原则，合成一条新的DNA链。这个过程称为延伸。 ④PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。 高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化 4、 Taq DNA聚合酶的应用 5、 缓冲液需要为PCR反应提供的物质 DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。 PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出。 6、 PCR技术的特点 7、PCR技术与体内DNA复制的区别： 1. PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要； 2. PCR需要耐热的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物体内的聚合酶在高温时会变性； 3. PCR一般要经历三十多次循环，不需要ATP提供能量;而生物体内DNA复制需要生物体自身的ATP。 8、 PCR的反应过程 1）、PCR的反应步骤 PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸 ①变性（模板DNA解旋） 模板DNA经加热至90℃以上