侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用.pdfVIP

侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用 1、侧流免疫层析检测技术 侧流免疫层析检测技术( LFIA) 也称横向流动免疫检测技术，是出现于20 世纪60 年代 初期的一种独特的免疫分析方式，以条状纤维层析材料为固相，借助毛细管的吸附作用使样 品在层析材料上移动，其中样品中的待测物与层析材料上一定区域的抗体结合，通过酶促显 色反应或直接使用着色标记物短时间获得直观的测试结果。 侧流免疫层析技术是一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法，主要 用于病原体，激素，药物和代谢物等的检测，原理是通过标记抗原或抗体来识别待检物。侧 流免疫层析试纸条主要包括样品垫、结合垫、层析膜、吸收垫、背衬及应用于试纸条上的各 种试剂。根据待检测物分子的大小不同分为两种主要类型：双抗体夹心法和竞争法。 1.1 双抗体夹心法 双抗体夹心实验法是利用捕获抗体和检测抗体进行测定。一般用于检测大分子量的抗 体、抗原类物质。大分子量分析物包含有两个或两个以上的结合位点，结合垫为着色标记物 与待测抗原的特异性抗体( Ab1) 的偶联物，检测线为待测抗原的另一表位特异性抗( Ab2) ， 质控线为抗Ab1抗体( Ab3) 。当待测样品中含有一定量的抗原时，样品通过层析作用到达结 合垫位置，抗原和Ab1发生反应，与检测线的抗体形成双抗体夹心复合物，达到一定量后， 通过沉积的标记物显示待检物的量。残留的抗体继续泳动到质控线位置，与Ab3反应而显色， 得到阳性结果，见图1。样品中不含抗原，标记物和检测线抗体不发生反应，而质控线显色， 得到了阴性结果。检测线和质控线均不显色时，表示试纸条无效。 1.2 竞争法 小分子量分析物只有一个抗体结合位点，使用竞争免疫试验进行检测。竞争法有两种类 型，一种是检测区固化的是待测抗原或待测抗原的类似物。结合垫上为着色标记物与待测抗 原的特异性抗体( Ab1) 的偶联物。当样品中含有待测抗原，样品待检测抗原与Ab1结合，由 于竞争抑制作用，检测线处抗原不再发生反应，检测线处不显色，随后，抗原抗体复合物与 抗Ab1抗体Ab2相结合，在质控线处显色，如图2 。反之，随着抗原浓度的显色加深。另一种 在检测区固化的是待测抗原的特异性抗体( Ab1) 。结合垫上为着色标记物和待测抗原或待 测抗原类似物偶联物。通过样品中抗原和抗原偶联标记物竞争结合检测线上抗体，达到检测 的目的。 北京华安麦科生物技术有限公司 电话：+86-10/ 传真：+86-10网址： 地址：北京市昌平区科技园区超前路6 号 邮编：102200 1 图1 双抗夹心法原理示意图 图2 竞争法原理示意图 2、侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用 侧流免疫层析是一种将免疫技术、色谱层析技术和免疫标记技术相结合的固相膜免疫分 析方法，这种层析技术常常是借助外来的标记物获得可测量的信号来分析结果。因此，有必 要寻求一种高灵敏的免疫标记物，建立准确、快速、简便的真菌毒素检测方法。 纳米粒子一般是指颗粒尺寸在1～100 nm 范围内的超微粒子。它具有表面效应、小尺寸 效应、量子效应、宏观量子隧道效应等特性。与正常粒子相比，纳米粒子具有大的比表面积， 其光、热、磁敏感特性和表面稳定性较高。同时，纳米材料用于生物分析标记物质，可大大 改善标记物的性能，显著提升现有分析方法的灵敏度及特异性，其在抗原抗体的标记上具有 很大的应用潜能。纳米材料的引入为免疫层析技术实现高灵敏，高特异，快速检测奠定了良 好的基础。采用侧流免疫层析技术对真菌毒素进行检测当中应用最为广泛的标记物是纳米粒 子。 用于毒素检测的纳米粒子标记物按材料可分为荧光纳米粒子、金纳米粒子以及磁性纳米 粒子等。其中荧光纳米粒子又包括量子点及其量子点微球、荧光微球以及时间分辨荧光微球 等； 金纳米粒子包括常规胶体金及AgAu 复合纳米粒子等。 2.1 荧光标记免疫层析技术 2.1.1 量子点层析技术