连续灭菌.pptVIP

1、灭菌方法 2、培养基的湿热灭菌 对数残留定律 阿仑尼乌斯定律 3、分批灭菌 高温对培养基成分的有害影响 形成沉淀物 有机物：如多肽类沉淀 无机物：如磷酸盐、碳酸盐等沉淀 破坏营养，提高色泽 褐变：产生氨基糖、焦糖或黑色素 改变培养基的pH（一般为降低pH） 降低培养基浓度（气温低时会增加冷凝水） 消除高温对有害影响的措施 采用特殊加热灭菌法（连续灭菌方法） 对易破坏的含糖培养基进行灭菌时，应先将糖液与其他成分分别灭菌后再合并 对含Ca2+或Fe3+的培养基与磷酸盐先作分别灭菌，然后再混合，就不易形成磷酸盐沉淀 对含有在高温下易破坏成分的培养基（如含糖组合培养基）可进行低压灭菌 * * 上节回顾 在发酵罐体积越来越大的今天，分批灭菌的对培养基成分破坏大、升降温时间长这一缺点就更为突出。而以“高温、快速”为特征的连续灭菌能够很好的避免了这一缺点。 连续灭菌：就是将配制好的培养基在通入发酵罐时进行加热、保温、降温的灭菌过程，也称之为连消。 三、 培养基的连续灭菌 连续灭菌时，培养基在短时间内被加热到灭菌温度(130—140℃)，短时间保温(5—8 min)后，被快速冷却，再进入早已灭菌完毕的发酵罐。 20-30s 5-8min 20-30s 时间/min 温度/℃ 25℃ 135℃ 培养基连续灭菌过程中温度的变化 连续灭菌的设备流程图如图5—6： 图5－6培养基连续灭菌设备流程 连续灭菌注意事项： 发酵罐应预先前先进行空罐灭菌。加热器、维持罐及冷却器也应先行灭菌。 培养基的不同成分(耐热与不耐热、糖与氮源)可在不同温度下分开灭菌，以减少培养基受热破坏的程度。 5.对蒸汽的要求高 5.发酵设备利用率高 4.不适合于含大量固体物料的灭菌 4.避免了反复的加热和冷却，提高了热的利用率 3.染菌的机会较多 3.易于实现管道化和自控操作 2.操作较麻烦 2.操作条件恒定，灭菌质量稳定 1.对设备要求高，需设置加热和冷却装置 1.灭菌温度高，可减少培养基中营养物质的破坏 连续灭菌 缺点 优点 灭菌方式 4. 发酵罐的利用率较低 4.适合于含大量固体物料的灭菌 3.不适合于大规模生产过程的灭菌 3.适合于小批量生产规模 2.需进行反复的加热和冷却，能耗较大 2.操作要求低，适于手动操作 1.培养基的营养物质损失较多，灭菌后培养基的质量下降 1.设备要求低，不需另外设置加热和冷却装置 分批灭菌 缺点 优点 灭菌方式 连续灭菌和分批灭菌优缺点比较 656 4.4 5 135 连续 1.0 1.9 2.0 360 6.5 5 135 连续 0.9 1.9 2.0 88 4.4 25 121 分批 1.0 1.9 2.1 5.0 6.5 45 121 分批 0.8 1.9 2.0 u/ml min ℃ % % % 维生素B12 pH 灭菌时间 灭菌温度 类型 动物浸膏 玉米浆 葡萄糖 产物收率 灭菌过程的类型和条件 原料 分批灭菌和连续灭菌对维生素B12收率的影响 相反，高浓度盐类、色素等的存在会削弱微生物细胞的耐热性，故一般较易灭菌。 此外，还与微生物细胞的菌龄、耐热性、空气排除情况、搅拌等因素有关。 培养基灭菌具体采用那一种灭菌方式，应视培养基的成分、体积，结合当地蒸汽、发酵罐、场地等情况，分析两种灭菌法的优缺点而确定。 一旦确定采用连续灭菌，也要考虑到万一蒸汽压力不够时和灭菌不透时改用分批灭菌的设备余量。 连续灭菌的操作单元： 配料、预热、加热、保温、降温。 (1)、配料 配料罐用于培养基的配制。 然后将培养基用泵打入预热桶中。 (2)、预热 预热桶的作用：定容、预热。 预热的目的：使培养基在后续的加热过程中能快速地升温到指定的灭菌温度，同时可避免太多的冷凝水带入培养基，还可减少震动和噪声。 一般可将培养基预热到70～90℃。 (3)、加热 预热好的培养基由连消泵打入加热器。 加热器也称连消塔，使培养基与蒸汽混合并迅速达到灭菌温度。 加热采用的蒸汽压力一般为0.45～0.8 MPa，加热器有塔式加热器和喷射式加热器两种见图5—7。 加热的目的：使培养基在较短的时间(20—30 s)里快速升温。 图5－7 ；连续灭菌的加热设备 进 设培养基流量为G，m3／s；进入加热器的温度为tp。；灭菌温度为t；由热量平衡得加热蒸汽用量为 ρ：为培养基的密度，kg／m3； C：培养基的比热容，J／kg；