PCR的临床应用知识教材教学课件.pptVIP

基本原理 以DNA为例 （1）DNA变性： （2）降温退火： （3）引物延伸： 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 原理 第一步 – 加热变性 预处理 第二步 – 引物与靶序列退火 第三步 - 引物延伸 第1个 PCR 循环完成后 – 得到两个拷贝的靶序列 30次循环后靶序列扩增的数量 No. of No. Amplicon Cycles Copies of Target 1 2 2 4 3 8 4 16 5 32 6 64 20 1,048,576 30 1,073,741,824 30次循环扩增后可达10亿的基因片段 PCR技术的特点 灵敏度高 特异性强 快速简便 应用范围广 不合格标本带来的后果 标本不合格 结果不准确 诊断错误 治疗错误 70% 耽误治疗 PCR结果单位的换算 3.5E+005 IU/ml(3.5×10^5基因/拷贝)----表示一毫升血清中有35万个HBV病毒微粒。 HBV—DNA的变化 在患者治疗过程中检