[理学]分子生物学Chapter 4 转录.ppt

Chapter 4Gene Expression基因表达 （1） 转录Transcription 4.1 基本概念 转录模板 模板链（-），非编码链，反义链 非模板链（+），编码链，有义链 4.1 基本概念 转录单位（Transcription Unit） 从转录启动子始到终止序列为止的一段DNA序列，它控制蛋白质或功能RNA的转录。 原核生物的转录单位 – 操纵子，多顺反子 真核生物的转录单位 – 单个转录单位，单顺反子 4.1 基本概念 不对称转录（Asymmetric Transcription） ： 对特定基因而言，转录时只使用其中一条链作为模板。 不对称转录的验证： 假设1：体内对称转录 假设2：体内不对称转录 不对称转录的验证 不对称转录的验证 转录过程概述 4.2 原核生物的转录 启动子 原核生物启动子 RNA聚合酶 转录起始和转录终止 4.2.1 原核生物的转录启动子 启动子的发现与证实 原核生物的核心启动子（Core promoter） 原核生物的扩展启动子（Extended Promoter） 转录启动子变异 （1）、-10区、-35区的碱基突变 -10区的碱基突变 -10区和-35区碱基突变 单独突变：-10区或-35区突变 转录效率下降 100倍 同时突变：-10区和-35区同时突变 转录效率下降1000倍 转录启动子变异（2）、-35区与-10之间的间距的突变 4.2.2 原核生物的RNA聚合酶 DNA-dependent RNA polymerase （依赖DNA的RNA聚合酶，RNA Pol） RNA聚合酶亚基的分离 Bergess, R and Travers, A., 1969 Separating the subunits of E. coli RNA polymerase by SDS杂交竞争实验 杂交竞争实验检测T4噬菌体的RNA的生物合成 σ的功能 核心酶可以非特异地识别和结合模板DNA。 当σ因子和核心酶一起构成全酶时，可以提高RNA聚合酶对模板DNA特定区域的结合常数。 σ因子指引RNA聚合酶结合到转录启动子上。 σ因子特异性的表现 σfactor’s specificity is in harmony with genes, development stages or tissues. RNA聚合酶其它亚基的功能 4.2.3 原核生物的转录起始 Promotion of Transcription in Prokaryotes 原核生物的RNA聚合酶全酶的各种亚基依次发挥其功能，共同起始转录。 回顾 原核生物启动子的主要元件及其保守序列特征 启动子的 上调突变 vs.下调突变 原核生物RNA聚合酶各亚基的功能特征及其在转录起始中的作用 4.2.4 原核生物的转录终止 Termination of Transcription in Prokaryotes 原核生物中两种转录终止子 共同特征：反向重复的GC丰富区 依赖ρ因子的终止子的特征 4.3 真核生物的转录 真核生物RNA聚合酶 真核生物转录启动子 真核生物的转录启动 顺式作用元件 vs. 反式作用因子 4.3.1 真核生物的RNA聚合酶 种类和特性 RNA 聚合酶可视为调控转录的反式作用因子 根据其对α-鹅膏覃碱的敏感度区分为： RNA聚合酶Ⅰ RNA聚合酶Ⅱ RNA聚合酶Ⅲ 3种RNA聚合酶分别转录不同的基因类别： 3种RNA聚合酶组成 4.3.2 真核生物的转录启动子和转录起始 转 录 启 动 子（是调控基因转录启动的顺式作用元件） 对应于不同的RNA聚合酶，有3种类型的真核基因及其转录启动子 PolⅠ转录的基因 PolⅡ转录的基因 Pol Ⅲ转录的基因 转录启动子由两部分组成 核心启动子（基本启动子） 上游激活序列（Upstream Activating Sequence, UAS）或称上游启动子元件（Upstream Promoter Element, UPE） Class Ⅰ promoter Pol ⅡGene Class Ⅱ Promoter TATA Box The consensus sequence: TATAAAA – similar to the TATA Box in Prokaryote. Difference of TATA Box between eucaryote and prokaryote is the location with respect to the transcription start site. In Pro