[生物学]第九章基因工程与基因组学.pptVIP

; §1．基因工程(Gene engineering) 一、基因工程概述 1、基因工程的概念 20世纪70年代随着DNA重组技术的发展在遗传学上产生了一门新的分支遗传工程（ Genetics engineering ） 遗传工程:又称遗传操作（Genetic manipulation）,是以分子遗传学为 基础，以现代物理、化学等为手段，按照人们设 计的生物蓝图在细胞、染色体和基因等不同水平上，对生物的遗传性状进行定向改造，创造新的生物类型。 广义的遗传工程：包括细胞工程、染色体工程、 细胞器工程、基因工 程。 狭义的遗传工程：即基因工程; 2.基因工程的发展：　　基因工程的产生和发展在遗传学的发展史上是一次大革命，它打破了种、属的界线，可以在生物大系统内交流基因。其发展情况如下： 1971年，史密斯（Smith H. O.）等人从细菌中分离出的一种限制性酶 酶切病毒DNA分子，标志着DNA重组时代的开始。1972年　伯格（Berg P.）等用限制性酶分别酶切猿猴病毒和噬菌体 DNA，将两种DNA分子用连接酶连接起来 得到新的DNA分子。1982年，美国食品卫生和医药管理局批准，用基因工程在细菌中生产人的胰岛素投放市场。 自从1983年第一株转基因烟草获得以来，至今已有120种植物转基因获得成功。1996年全球大面积种植，并不断扩大。 1996年，克隆羊诞生。 2004年3月英国批准大面积种植转基因，但要求非常严格。 2005年德国通过法案，严格限制（包括实验室研究）。 ; 目前世界转基因作物主要为大豆、玉米、棉花和油菜等，以转基因大豆面积最大。 我国是世界上第一个商品化种植转基因作物的国家。到1999年我国已批准中试的转基因作物有48项：包括水稻、小麦、玉米、番茄、白菜、番木瓜、甜瓜、花生、棉花、烟草、广藿香等11种作物； 主要目标性状是抗虫、抗病、耐盐、抗冻、耐储藏和抗衰老等。 已批准环境释放的有49个品种，涉及水稻、玉米、大豆、马铃薯、番茄、甜椒、线辣椒、棉花、杨树、烟草等10种作物。 ; 3．基因工程研究内容：　　①．从细胞和组织中分离和纯化DNA； 　　②．利用能识别特异性DNA 序列的限制性内切酶剪切DNA分子，制备含有目的基因的DNA片???，或采用酶学和化学合成的方法人工合成基因；　　③．将DNA片段或人工合成的基因与能够自我复制并具有选择标记的载体在体外连接，形成重组DNA分子；　　④．将重组的DNA分子引入受体（宿主）细胞中，使重组DNA分子在受体细胞内复制，产生多个拷贝，即克隆；　　⑤．重组DNA能随宿主细胞的分裂而分配到子细胞中，使子代群体细胞均具有重组的DNA分子的拷贝；　　⑥．从繁殖的大量细胞群体中筛选和鉴定含有目标基因的重组DNA，受体细胞的克隆； ⑦. 能从选出的宿主细胞中回收、纯化和分析克隆的重组的DNA分子； ⑧.克隆的基因能够正常表达。;二、限制性内切核酸酶 限制性内切核酸酶，是一种核酸水解酶，主要从细菌中分离得到，这些酶能识别特定的核苷酸序列， 所以称之为限制性内切酶。是基因工程的常用工具酶。 ⑴．限制性内切酶的命名：根据其来自的生物名称，用英文字母和数字表示；　①. EcoR I 来自大肠杆菌（Escherichia coli）；　②. Hind Ⅲ来自嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）。 ;⑵．限制性内切酶的类别：根据限制性内切酶的作用特点，可分为两类：第Ⅰ类酶、第Ⅱ类酶 第Ⅰ类酶 ： 如EcoB(大肠杆菌B株)、EcoK(大肠杆菌K株)分子量较大(约300，000)， 由于这类酶的切割部位无特异性，是随机的，每隔一段DNA 序列随机切割双链DNA分子，切割点不固定，所以在基因工程中很少应用。　　第Ⅱ类酶（）：　如EcoR I(大肠杆菌)、Hind Ⅲ(嗜血杆菌)，分子量较小(约 20，000-100，000)， 这类酶的切割部位有特异性，可准确切割DNA双链的特异序列，因此在基因工程中广泛应用。 ;这类酶的切割点是对称序列。如回文对称序列（又称反向重复序列，即从两个方向阅读，其序列相同的序列）。识别特定的碱基序列，交错切割产生二个粘性末端。 二个平齐末端。 ;三、载体 载体是将“目的”基因即重组DNA分子导入受体细胞的运载工具。DNA载体：质粒、噬菌体、病毒、细菌或酵母菌人工染色体等，现在使用的载体都是采用基因工程的方法构建的。 载体的条件：　①.具有复制原点，能自我复制，并能带动携带的外源DNA一起复制。　②.具多克隆位点，即有