微生物学检验志贺菌属参考.pptVIP

肠道杆菌 志贺菌属 志贺菌属 是引起人类细菌性痢疾的病原菌 包括四群 ,共44个血清型 A群--痢疾志贺菌 B群--福氏志贺菌 C群--鲍氏志贺菌 D群--宋内志贺菌 形态染色 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、无鞭毛，多数菌株有菌毛 志贺菌 培养特性 兼性厌氧、营养要求不高 在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落菌落 SS平板－－无色菌落 　Mac平板－－无色菌落 　EMB平板－－无色菌落 宋内志贺菌多呈扁平、R型菌落，个别菌株可迟分解乳糖 生化反应 氧化酶试验（－） 分解葡萄糖、不分解乳糖，（个别菌株迟分解乳糖或不分解乳糖） KIA：KA－－ MIU：－ ＋/－ － IMViC：－/＋ ＋ － － 除A群外，均能发酵甘露醇 抗原结构 只有O、K抗原，无H抗原 K抗原可阻断O抗原与相应抗体的凝集 根据O抗原分4群和44型 志贺菌抗原分类 抵抗力 对理化因素抵抗力弱 尤其对酸敏感 对消毒剂敏感 易产生耐药性 变异性 S-R变异 耐药性变异 毒力变异 临床意义 致病物质： ◆菌毛 ◆内毒素 ◆志贺毒素：属外毒素，由A群志贺菌产生，具有肠毒、细胞毒、神经毒作用 所致疾病：经肠道传染，引起细菌性痢疾，有3种临床类型，即急性菌痢、慢性菌痢、中毒性菌痢 免疫性： ◆主要依赖局部SIgA， ◆病后免疫力不迟久 微生物学检验 标本采集 ◆粪便或肛拭 ◆新鲜脓血便 ◆立即送检或床边接种 ◆保存于30％甘油盐水或卡-布培养基 检验程序 检验方法 将待检标本接种肠道选择平板，35℃培养18～24小时。 若标本含菌量少，可先增菌（GN增菌液）4～6小时再分离培养。 挑取无色半透明菌落，进行初步生化反应鉴定。 符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定 血清学鉴定先用志贺氏多价诊断血清作玻片凝集试验，若凝集再用A、B、C、D群诊断血清鉴定到种、型。 血清学鉴定需注意K抗原的阻断作用，并应考虑是否为EIEC。 志贺菌鉴定 初步鉴定 ●挑取可疑菌落接种KIA、MIU培养基 ●若符合KIA：KA－－；MIU：－ ＋/－ －，再作志贺菌多价诊断血清玻片凝集试验 最后鉴定：全面生化反应和单价血清玻片凝集试验 若出现生化反应符合，血清学不凝集现象，应考虑K抗原的阻断作用，可将菌液加热100℃15～30min后，重复凝集试验，仍不凝集可考虑EIEC，需进行鉴别。 志贺菌鉴别 与EIEC的鉴别 与类志贺菌的鉴别 与动力不明显、不产H2S的沙门菌的鉴别 志贺菌血清学鉴定 先用志贺菌多价诊断血清鉴定群，再用A、B、C、D群单价血清鉴定血清型。 A群以1、2型为主，多有K抗原 C群型别多 D群只有1个血清型 B群型别多，抗原结构复杂，多无K抗原。 我国以B群为主 不典型菌株的鉴定 在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不凝集；血清学凝集，生化反应不符合，可考虑不典型菌株。 将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其恢复典型性状 志贺菌快速鉴定试验 直接凝集试验 免疫荧光菌球法 协同凝集试验 乳胶凝集试验 分子生物学方法 志贺菌鉴定依据 肠道选择平板上无色半透明菌落 KIA：KA－－ MIU：－ ＋/－ － 与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集 注意与EIEC、类志贺邻单胞菌、动力不明显的沙门菌鉴别 与EIEC的鉴别 与类志贺邻单胞菌的鉴别 与动力不明显、H2S阴性沙门菌的鉴别 大肠埃希菌生化反应结果 肠道杆菌 沙门菌属 沙门菌属 是寄生于人类和动物肠道中，生物学性状相似的革兰阴性杆菌 形态染色 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、有周鞭毛，多数菌株有菌毛 沙门菌 培养特性 兼性厌氧、营养要求不高 在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落菌落，与志贺菌菌落相似。 SS平板－－无色菌落，产H2S菌株，菌落中心呈黑色 　Mac平板－－无色菌落 　EMB平板－－无色菌落 生化反应 氧化酶试验（－） 分解葡萄糖、不分解乳糖 KIA：KA＋＋（伤寒沙门菌产酸不产气KA－＋） MIU：＋ － － IMViC：－＋ － ＋ 赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧：＋ 抗原结构 O抗原：化学成分为脂多糖；耐热；与相应抗体结合出现颗粒状凝集；沙门菌分群依据。 H抗原：化学成分为蛋白质；不耐热；与相应抗体结合出现絮状凝集；沙门菌分型依据。 Vi抗原：位于菌体外层；抗原性强，相应抗体可作为筛选带菌者指标；不耐热；能阻止O抗原与相应抗体结合；伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌有Vi抗原，有V－W变异。 几种沙门菌的抗原组分 变异性 S-R变异： H-O变异： V-W变异： 相位变异： 耐药性变异： 抵抗力 对理化因素抵抗力弱 尤其对酸敏感 对消毒剂敏感 易产生耐