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细胞生物学实验 海洋科学系 刘均玲 实验一 细胞膜的渗透性 一、实验目的与要求 1. 掌握细胞膜通透性的实验方法。 2. 观察并掌握相对分子量、脂溶性大小、电解质和非电解质对细胞膜通透性的影响。 二、实验原理 细胞膜在不断变化的环境中必须保持自身的稳定状态才能生存。细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻止另一些物质的通透，所以细胞膜具有选择通透性。 二、实验原理 三、实验材料、仪器和主要试剂 1. 实验材料：鸡血。 2. 实验器材： 小烧杯，试管，试管架，刻度吸管，注射器，秒表等。 3. 试剂 0.9%生理盐水； 2种低渗溶液：0.017mol/L氯化钠和0.032mol/L葡萄糖； 10种等渗溶液：0.17mol/L氯化钠、0.32mol/L葡萄糖、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸铵、0.17mol/L硝酸钠、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮。 四、实验方法与步骤 50%兔红细胞悬液的制备（制备流程如下） ： 以无菌方法抽取鸡静脉血液（1 mL兔血加0.9%生理盐水9 mL）混匀，离心（3000rpm）5min 弃上清 取沉淀 加0.9%生理盐水， 离心（3000rpm）5min，重复3次 弃上清 取沉淀，用生理盐水稀释， 制成50%鸡红细胞悬液备用 四、实验方法与步骤 溶血现象的观察： 取试管2支，分别加入0.017mol/L氯化钠和0.032mol/L葡萄糖低渗溶液3ml ，再加入2滴制备好的50%鸡红细胞悬液，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色悬液变成透明的血红蛋白溶液（红细胞发生破裂，造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液）。 四、实验方法与步骤 红细胞的渗透性 （1）取试管一支，加入0·17mol/L氯化钠溶液3ml，再加入2滴制备好的50%鸡红细胞悬液，轻轻摇动，混匀后静置于温室中，观察试管中发生溶血的时间及其变化。 注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？为什么？ 四、实验方法与步骤 （2）分别在下列几种等渗溶液中进行实验，步骤同（1）。 0.32mol/L葡萄糖 0.17mol/L氯化铵 0.17mol/L醋酸铵 0.17mol/L硝酸钠 0.12mol/L草酸铵 0.12mol/L硫酸钠 0.32mol/L甘油 0.32mol/L乙醇 0.32mol/L丙酮 五、注意事项 试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。 目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋；不溶血：－。 溶血现象可用一张有字的白纸来辅助识别，能够清楚地透过溶液看到溶液后方纸上清晰的字迹时，为完全溶血。 因相对分子质量大小对膜通透性有影响，所以将溶血时间适当地延长至15min，15min时 仍然不溶即判断为不溶血。 六、作业 实验二 鸡血细胞的体外融合试验 一、实验目的与要求 二、实验原理 细胞融合是用人工的方法使两个或以上的细胞融合成异核细胞。异核细胞可进入有丝分裂，使来自两个亲本细胞的基因组合在一起，形成只含一个细胞核的杂种细胞。 二、实验原理 PEG溶液作为助融剂可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。 二、实验原理 细胞融合的频率和活力与所用 PEG的分子质量、浓度、作用时间以及细胞的生理状态及密度等有关。本方法用分子质量为400～ 6000的PEG溶液可引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。 三、实验材料、仪器和试剂 1. 材料：成年家鸡。 2. 主要仪器： 注射器、刻度离心管、离心机、血细胞计数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。 3. 主要试剂： 0.85% NaCl溶液、GKN液、50%（W/V）PEG400溶液、Hanks液、0