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重组DNA技术与应用实例 生物工程092 范秋苹 090302219 一、 重组DNA技术 (Recombinant DNA Technique) 1、何为重组DNA技术(Recombinant DNA Technique)? 2、重组DNA技术研究的的理论基础； 3、重组DNA技术研究的方法步骤； 4、基因操作涉及的基本工具。 1、何为重组DNA技术(Recombinant DNA Technique)? 即用人工手段对DNA进行改造和重新组合的技术。包括对DNA分子的精细切割、部分序列的去除、新序列的加入和连接、DNA分子扩增、转入细胞的复制繁殖、筛选、克隆、鉴定和序列测定等等，是基因工程技术的核心，为遗传育种和分子遗传学研究开辟了崭新的途径。 2、重组DNA技术研究的的理论基础 在20世纪40年代确定了遗传信息的携带者、即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题； 50年代提出了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题； 50年代末至60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说,成功地破译了遗传密码，阐明了遗传信息的流动与表达机制。 3、重组DNA技术研究的方法步骤 重组DNA技术一般包括四步： 获得目的基因； 与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子； 用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传； 对转化子筛选和鉴定,在具体工作中选择哪条技术路线； 对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。 4、基因操作涉及的基本工具 目的基因 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 基因克隆的载体 受体细胞 二、重组DNA技术应用实例 本篇按受体细胞不同来分类； 受体细胞为原核生物（举例说明） 例1：重组人转化生长因子β?在大肠杆菌中的表达及其活性检测 例2：纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达* 受体细胞为真核生物（举例说明） 例1：人类胰岛素基因的克隆及其真核表达载体的构建 例2：纳豆激酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 受体细胞为原核生物（例1） 重组人转化生长因子β?在大肠杆菌中的表达及其活性检测 摘自：现代康复2001 年1月第5 卷第1期 Modern Rehabilitation, January 2001,Vol.5,No.1 Abstract: Objective With the method of gene recombination to exprese the TGF- β? in escharichia coil and to determin its natural activity . Methods The plasmid pTGF- β? was constructed by recovering TGF- β? cDNA fragment from pBSK-TGF- β? with EcoR1 and Pst1 Digestion,and inserting it directly into PBV 220 prkaryotic expression cector,at the same sites.Therecombinant plasmid was transformed ino E coli DH5α and JM109 to establish the prkaryotic expression system and induced at 42℃ to express encoded protein. Results SDS,western-blot confirmed that the system can express efficiently TGF- β? protein,which was 23 percent of the total bacterial soluble protein.TGF- β? natural activity has been determined by NRK cell.Conclusion The establishment of this system providing an efficient expression cell line for producting TGF- β? protrin on a large scale. 摘要： 目的 运用基因重组的方法，对人转化生长因子β? (TGF- β? )进行基因克隆，并在大肠杆菌中表达。同时检测其生物活性。 方法 以pBV220 作为原核细