运载体基因的针线——dna连接酶.pptVIP

基因工程简介 * * 一 基因工程的基本内容 主要内容 1）基因工程的概念 2）基因操作的工具 3）基因操作的基本步骤 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 实质 基因重组 （一）基因工程的概念 基因工程步骤中需要哪些工具？ （二）基因操作的工具 步骤一的工具： 步骤二的工具： 步骤三的工具： 基因的剪刀——限制性内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 基因的剪刀——限制性内切酶 （二）基因操作的工具 限制酶 DNA的一段序列 EcoRI识别序列 ECORI切割位点 作为运载体必须具备哪些条件？ （二）基因操作的工具 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 基因的运载工具——运载体： 大肠杆菌的质粒： （二）基因操作的工具 基因的运载工具——运载体： 基因的针线——DNA连接酶 （二）基因操作的工具 DNA连接酶连接形成 磷酸二酯键 用相同的限制性内切酶切割 目的基因 四个基本步骤： 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 （三）基因操作的基本步骤 目的基因的提取方法 （三）基因操作的基本步骤 直接分离基因 人工合成基因 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA ：鸟枪法 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离基因——鸟枪法 　　将供体细胞中的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到不同的受体细胞中去，让这些DNA片段在受体细胞中扩增。从中找出含有目的基因细胞，并将含有目的基因的DNA片段分离出来。　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大。一般不适用于真核细胞的基因。 ⑵人工合成基因法 DNA合成仪 　　②直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 　 ①反转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 *