[化学]色谱方法的选择样品前处理.pptVIP

高效液相色谱方法的建立 一、准备好样品（样品的前处理） 样品的净化、浓缩 1.液-液萃取 2.液-固萃取 3.样品的衍生技术 4.微波萃取技术 5.超声波萃取技术 6.超滤膜技术的应用 二、色谱柱的选择（介绍液相色谱的固定相） 三、流动相的选择： 四、检测器的选择： 紫外检测器（选择波长） 荧光检测器（选择激发波长、发射波长） 示差检测器 固相萃取方法的建立 1.柱容量：正相或反相固相萃取小柱的容量为1—3%。即，100mg的正相或反相固相萃取小柱，能保留1—3mg样品。当样品中分析物有强的保留和样品干扰小时，可得到高容量。原则是样品越脏，量就越大，所需固定相越大。 2.溶剂的选择要合适：如果溶剂选择合适，样品的净化程度和分析物的回收率会提高，但是，即使已经知道样品和分析物的许多信息，最佳的溶剂和固定相也不能选择很合适。 3.收集淋洗/洗脱液：收集并分析每一个上样和淋洗/或洗脱液，如果分析物的浓度足够大，可直接上色谱仪分析，如果分析物的浓度较低，就必须浓缩后分析。 4. 流速的稳定性：对于每一种固相萃取方法，流速的稳定性是非常重要的，如果流速变动大，将导致低回收率和重复性差. 5. 回收率：a.用上述建立的方法萃取含有已知量的分析物（空白），然后分析洗脱液测定回收率，b.如果结果满意，需继续萃取样品、测试样品中的分析物，此步骤是为了检测方法对样品的净化程度，如果存在干扰，应改进方法或更换固定相. 6. 加样回收率：是方法的最后测试指标，把几个浓度的已知量的分析物分别加到样品中，测其回收率的标准偏差，如果回收率、标准偏差、样品的净化程度都可以接受，固相萃取方法就建立起来了. 一、样品前处理技术 在做样品之前首先要知道样品大致情况是纯品还是粗品，如果是粗品是哪一类的原料。 要了解待测组份的性质和化学结构，才能够为样品的前处理和色谱条件的选择打基础。 上机分析之前 ，准备好样品、选择好色谱条件、保证仪器正常运行。 注：样品在上机分析之前一定要过滤 流动相要过滤、脱气 在复杂基体中低浓度有机化合物的分离和测定是分析化学所面临的一个挑战．虽然分析仪器的自动化程度日益提高，但在发展分析方法的同时，人们或多或少忽视了样品的预处理问题。 然而在分析复杂样品，如生物样品、环境样品、植物样品等，为了获得比较可靠的鉴定结果,必须花费很多的人力和经费，并且由于前处理步骤多，如果前处理不当，往往会使全过程的回收率降低，会发生定性定量错误和色谱柱寿命缩短等问题．因此，提高和掌握样品的前处理技术是完善检测全过程的重要环节。 目前仍沿用溶剂提取、色谱分离或液-液分配等纯化方法。 样品预处理的内容繁多，如 液体样品： 直接上机、稀释、富集、抽提、离心、 过滤后上机 固体样品：溶解、离心、萃取 生物样品（如，血液、尿液、动物组织及器官等样品）：预处理 一般说来，样品预处理要达到的目标如下： 1．去除基体中干扰样品分析的杂质，提高分析精度和分离效果； 2．提高被测定化合物检测灵敏度； 3．提高样品与流动相的兼容性，从而改善 定性定量分析的重复性． 高效液相色谱分析样品时没有统一的前处理方法。必须根据样品的种类和待测项目决定前处理方案，但原则上仍应考虑几下操作环节： 如取样、试样的调制、提取、纯化、浓缩等步骤， 至于各种具体样品的前处理可以进一步参考有关资料。 （一）取样与调制 固体块状样品的取样与调制 为了得到较为可靠的结果，取样的代表性极为重要。一般取样操作要点可概括为： 第一步随机抽样，抽样量要根据样品数量而定， 第二步再按四分法将试样缩分到所需的量， 第三步再取所需的量。样品得到后必须进行粉碎和混匀， 小量样品可以使用研钵，较多的试样可使用电动 粉碎机粉碎。粉碎后，应通过20一30目筛孔用筛过筛，混合均匀，制得试样。  （二）提取方法 提取方法： 液-液萃取 液-固萃取 超声波萃取 微波萃取 膜技术：微渗透 超滤膜技术 从技术角度而言．植物及食品样品分析最为困难的是：待测成分从样品基体中将其分离。 目前，常用的提取分离方法仍采用溶剂提取法． 选择提取溶剂时，应考虑到： 1、提取溶剂是否会与待测成分发生反应； 2、欲分析物质的极性； 3、欲分析物质在不同溶剂中的溶解性； 4、欲提取样品的类型(含水多、含油多、干材等）； 5、溶剂的毒性； 6、溶剂的挥发性 7、溶剂的纯度； 8、溶剂的价格等。 一般亲水性溶剂应用于提取亲水性化物， 而疏水性溶剂最适宜提取脂溶性和油溶性