液相色谱工作原理教材教学课件.ppt

CONFIDENTIAL CONFIDENTIAL 液相色谱工作原理 流动相储液瓶 单元或多元泵 梯度混合器 预柱 手动-进样器 自动-进样器 保护柱 色谱柱 柱后反应器 柱温箱 检测器 馏分收集器 积分仪 工作站 计算机 接口 温度控制单元 样品制备单元 液相色谱仪器结构组成示意图 溶剂传输泵 溶剂传输泵的要求 能在高压下连续工作 较宽的可程序控制的流速范围 耐化学腐蚀 无脉动输出 输出流量稳定、重复性好 易安装维护 步进电机 齿轮变速箱 活塞 液体 到色谱柱 密闭输液系统 工作过程：步进马达带动活塞输液 优点：流速恒定，无脉冲 缺点：输液泵缸溶剂有限 活塞与液缸间密封要求高，更换溶剂不方便 造价高 溶剂输出泵—柱塞泵 工作过程：电机带动偏心轮，驱动活塞往复运动 在高压下连续以恒定的流量输送液体 优点：溶剂不受限制 死体积小 溶剂混合均匀 缺点：会产生脉冲 需增加脉冲阻尼器 溶剂输出泵—往复泵 溶剂进入： 活塞收回、腔内形成低压 入口阀打开，出口阀感应压差而闭合 溶剂输出： 活塞推出、腔内压力增加 出口阀打开，入口阀感应压差而闭合 单向阀的特点： 密封性能相当好 可以非常敏感地感应压差而迅速闭合 往复泵的工作原理 并联往复泵的工作原理 进样阀 六通阀设计 耐高压，低死体积 可以手动或自动旋转进样阀 自动进样的重复性优于手动进样 上样(load)状态 进样(inject)状态 进 样—层 流 效 应 以定量环的体积定量 对一般样品而言，进样体积需大于定量环的2.5倍 4 倍则更加保险 倍数 进 样—进 样 量 全定量环进样 准确，但浪费样品 至少需要2.5倍进样体积的样品 部分定量环进样 进样量 进样环体积的一半 无层流效应的影响 误差来源于进样针及操作人员 使用内标法将可以提高进样的准确度 检 测 器 作用：检测色谱柱流出物组份浓度的变化 理想的检测器： 灵敏度高 对所有溶质都有快速的相应 不引起柱外谱带扩展 线性范围宽 对样品无破坏性 检测器响应对流量及温度变化不敏感 检 测 器 分 类 按检测对象分类 整体性检测器：检测流动相的总体物理性质 如：示差折光检测器、电导检测器 灵敏度低、易受温度影响的波动、不适合梯度洗脱 溶质性检测器：测量溶质的某种特性或物化性质的变化 如：紫外检测器、荧光检测器 流动相不能有紫外吸收 按选择性分类 选择性检测器：紫外检测器、荧光检测器、电导检测器 通用性检测器：示差折光检测器 检测器的噪音和漂移 噪音和漂移反应了检测器的稳定性 噪音 无溶剂通过检测器时，输出信号的变化 电路及泵的脉冲引起短噪音，不影响色谱 峰的分辨率，但影响检测限 长噪音来自检测器本身、或流动池有气泡，温度及流量的变化也会引起长噪音 漂移 基线随时间增加朝单一方向偏移 电源电压不稳、温度及流动相发生缓慢变化 对分析误差及检测能力有影响 检测器的技术指标 灵敏度 检测器的主要性能指标，样品进入检测器的响应信号 灵敏度越高检测限越低 检测限 两倍噪音时所需要的样品量 检测限低、检测性能强、检测时所需要的样品少 线性范围 检测信号与被检测物呈线性关系的范围 下限定义为两倍噪音 紫外-可见波长检测器 应用范围最广泛的检测器 大约占使用的70% 紫外光区：190~370nm 特点 灵敏度高、噪音低、线性范围宽 为溶质型检测器、对流速和温度的变化不敏感 为选择性检测器，必须使用无紫外吸收的溶剂作流动相 为浓度型检测器 为非破坏性检测器，可与制备色谱或其他设备串联 结构简单、维护方便 I0 I Absorbed radiation Transmitted radiation Incident radiation Reflection b A = log ( ) = a b c Io I 紫外-可见波长检测器工作原理 朗伯-比尔定律： 吸光度与化合物的浓度成正比 理论检测限估算 摩尔吸光系数ε（A =εb c） 紫外检测器灵敏度很大程度取决于样品的 ε值 ε 与物质分子结构有关 估算最低检测浓度 Cmin