[医药]牛血清白蛋白在聚乙二醇_葡聚糖双水相体系中分配特性的研究.pdf

氨基酸和生物资源 　2006 , 28 ( 3) : 56 ～59 Am ino A cids B iotic R esou rces 牛血清白蛋白在聚乙二醇 /葡聚糖双 水相体系中分配特性的研究 郑 楠 ,朱建航 ,刘 杰 (南昌大学环境科学与工程学院 ,江西 南昌 330029) 摘要 :采用考马斯亮蓝 G250染色法测得室温下 B SA 在 PEG/ dextran双水相体系中的分配系数 。以 B SA 在 PEG/ dextran 体系的下相富集为 目标 ,研究了 PEG的分子量 、浓度 、dextran浓度以及所加入中性盐的种类与浓度 、体系 pH 诸因素对其分配 特性的影响 。实验结果表明 ,在 PEG4000 / dextran体系中 ,采用 PEG质量分数 9% - dextran 质量分数 9%的浓度组成 , 同时在 pH = 7. 0,N aCl浓度为 0. 2 mo l ·L - 1或 pH6. 0,N aCl浓度为 0. 34 mol ·L - 1的工艺条件下萃取 B SA 均可达最小分配系数 ,其值 为 0. 0 14。 关键词 :双水相系统 ; 分配系数 ; 牛血清白蛋白 中图分类号 : Q512 + . 1 文献标识码 : A 文章编号 : 1006 - 8376 (2006) 03 - 0056 - 04 　　与传统溶剂萃取相比,双水相萃取最大的优势 1. 2　实验仪器 在于双水相体系可为生物活性物质提供一个温和的 TGL - 16G数显高速离心机 ,江苏城西晓阳电 环境 ,在萃取过程中保持生物物质的活性及构象 ,而 子仪器厂提供 ; UV 762 紫外 /可见分光光度计 ,上海 且双水相萃取还有收率高 、成本低 、可连续化操作等 精密科学仪器有限公司提供 。 优点 。现被广泛应用于生物化学 、细胞生物学和生 1. 3　实验方法 物化工等领域的产品分离和提取 , 尤其在蛋 白质 、 1. 3. 1 　制 作 由 PEG1000、PEG4000、PEG6000、 酶 、核酸等生物大分子的分离纯化方面更是备受关 PEG10000 与 dextran 形成的各体系相图。 注 。在蛋白质的分离纯化中 ,常用的双水相体系是 根据 A lbertsson[ 1 ] 的方法绘制相图:将已知浓度 ( ) ( ) 聚乙二醇 PEG /葡聚糖 dextran 和 PEG/盐两类 的 dextran 溶液逐滴加入 PEG 的浓溶液中 ,直到出 体系 。由于 PEG /盐体系的选择性不高 , 且易导致 现浑浊 。记下此时的体系组成并向 PEG溶液中加 蛋白质变性 。故本文选择 PEG/ dextran 双水相体系 入 1 g水 ,摇匀待溶液变清后重复上述操作 。将所 进行研究 , 以 B SA 为模型蛋白,考察该体系表面性 记录的体系组成以 PEG浓度为纵坐标 , dextran 浓 ( ( ) 质 、电荷间作用和各种作用力 如憎水键 、氢键和离 度为横坐标作图即得到双结点曲线 图 1 。 ) 子键 等因素对 B SA 分