免疫试验二.PPT

单向扩散试验（定量） 平板法（Mancini曲线或Fahey曲线） 此法由Mancini于1965年提出，是一种简易的抗原定量技术。 由于试验中抗原向四周扩散，故又称单向辐射状免疫扩散（single radial immunodeffusion，SRID）。 各种蛋白质只要符合以下3条，几乎皆可用SRID定量测定：①备有仅对某待测抗原的单价特异抗血清；②备有已知含量的标准品；③待测品含量在1.25μg/ml以上（单向扩散技术的敏感度）。最常用于临床检测的项目有IgG、IgA、IgM、C3、C4、转铁蛋白、抗胰蛋白酶、糖蛋白和前白蛋白等多种血浆蛋白。 Single immunodiffusion is quantitative. Double immunodiffusion is qualitative mainly. Single immunodiffusion, Ab, incorporated in agar; In double immunodiffusion, no antibodies are incorporated in agar beforhand. （一）2、双向琼脂扩散试验 （定性或半定量） Ag Ab Ab ？ Ag Ab ？ Ag Ab ？ Ag ：标本中无Ag ：标本中有Ag （相同抗原?） （在Ag、Ab比例合适处形成沉淀线） 标本 阳性对照 (fusion) (cross) (spur) αR1αR2 R1,2 Ab ？ Ag Ab ？ Ag Ab ？ Ag ：标本中无Ag ：标本中有Ag （相同抗原） 标本 阳性对照 （一）2、双向琼脂扩散试验（定性） （请按照实验指导讲义方法进行操作） Ab Ag Ag ? ? ? ? Ab ？ Ag 1. Make a agar plate (without Ab or Ag) 2. Punch wells Add samples: Anti-AFP positive control (AFP) Test sample (AFP?) Ab Ag ？ Ab ？ Ag Ab ？ Ag ：no Ag(AFP) in sample serum ： Ag(AFP) in sample serum Result (1): 4. incubation for 24 hours and observe results ：no Ag(AFP) in sample serum ： Ag(AFP) in sample serum Ab Ag Ag Ag Ag ? ? ? ? Ab Result (2): sample serum (AFP?) AFP, (positive control) Anti-AFP Ab Ag Ag ? ? ? ? sample serum (AFP?) Anti-AFP Result (3): Ab ？ Ag AFP, (positive control) 明天下午看结果 （一）3、对流免疫电泳 原理图： Ab Ag ＋ － pH 8.6 电泳力： 电渗力： 合力： 运动方向： * 对流免疫电泳检测方法： Ab 阳性对照（Ag） 待测标本（？Ag） （有沉淀线：有Ag； 无沉淀线：无Ag） ？ ＋ － 对流免疫电泳检测方法（加样图）： Ab（抗AFP） 阳性对照（Ag） （阳性血清，含AFP） 待测标本（？Ag，？AFP） （有沉淀线：有Ag，AFP； 无沉淀线：无Ag，无AFP） ？ ＋ － 【方法】 1.? 制板 加热溶化1.5%琼脂，待冷却至50~60℃时，用10ml吸管吸取4ml加于载玻片上。 2.?打孔 在凝固后的琼脂板上，用打孔器打两排孔，孔间距为4mm 。 3.??加样 将琼脂板上有标记孔的作为阴极，然后按图11所示加满各孔。 4.?电泳 将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。琼脂板两端用纱布与缓冲液相连，接通电源，控制电压6~10V/cm板长（两端电压约50V），电泳时间约30~60min。 5.?关闭电源，取出琼脂板，观察结果。 （二）补体参与的免疫反应 1、溶血反应 补体 SRBC + Ab SRBC-Ab 溶血 （