高效液相色谱法测丹参酮含量.docVIP

高效液相色谱测定丹参酮ⅡA含量 【原理】利用各组分在两相中的分配系数的不同而获得分离。 【仪器与试剂】1.仪器：液相色谱仪；微量注射器；C18反相色谱柱；棕色瓶（25ml，50ml）；吸量管（2ml）；超神提取器。 2.试剂：甲醇（色谱纯）；蒸馏水。 3.试药：丹参酮ⅡA对照品，单身药材。 【实验内容】 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270 nm，理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000. 对照品溶液的制备 取丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含16.25ug的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。 【实验数据及处理】 运用外标法定量分析，分别精密量取一定量的对照品和试样，分别进样相同体积的对照品溶液和试样溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测的峰面积，用下式可以计算出供试品的浓度。 C供/C对=A供/A对 = C供=（A供/A对）*C对 20片总重量：0.6025g C对=16.25μg/ml A供=2999.47（mv/sec） A对=1088.09（mv/sec） C供=（A供/A对）*C对 =（2999.47/1088.09）*16.25 =44.80μg/ml W（%）=（M丹参酮ⅡA/M药材）×100% =（44.80×10-6g/0.6025g）×100%=0.744% 20片复方丹参片中含丹参酮ⅡA量：4.48mg。 每片含丹参酮ⅡA量：0.224mg。