双子叶植物转基因载体构建试剂盒(CatalogNoVK0102).pdfVIP

北京唯尚立德生物科技有限公司 双子叶植物转基因载体构建试剂盒(Catalog. No. VK011-02) 产品组成 组成 VK011-02s VK011-02L PlantTransgenic Vector 10T 20T Easy Assembly Mix 10 vial 20 vial （Cat.No.VK009 ） Positive control(PC) 10μL 10μL 注意：收到试剂盒后，使用前请离心，避免液体滞留在离心管盖、管 壁上。 保存条件:-80℃保存一年；或-20 ℃保存两个月。请将产品于-80℃保存，避免反 复冻融 产品说明 本试剂盒通过Easy Assembly 的体外重组方法一步完成转基因植物双元载 体构建。该方法不需要传统酶切连接的克隆方式，只需在目标基因的PCR 产物 上加21bp 同源接头，就能高效、方便地把目标基因构建到植物双元载体上，实 现在转基因植物上高表达目标基因。 B A 构建原理： A. 一步PCR 法构建转基因植物双元载体；B.分步PCR 法构建超长转基因植物 双元载体 试剂盒的优势： 1. 采用零背景克隆技术，目标基因阳性克隆率特别高； 2. 操作简单，克服了双元载体大片段分子构建的酶切连接困难，只需做PCR，就可以 完成质粒的构建； 3. 反应时间短，PCR 产物+质粒+ Easy Assembly Mix 反应25 分钟就可以进行转化； 4. 超长基因的构建一步完成，简单省力； 5. 多种表达载体的选择； 010 order@ 北京唯尚立德生物科技有限公司 6. 基因片段最长可达12kbp 以上； 注意事项：若目标序列上有过多的重复序列，则可能会在错误的位置发生同源重组， 产生错误的拼接产物混在正确的目标质粒中。 试剂盒的特性： 1. 玉米Ubi 启动子高效表达目标蛋白； 2. 双子叶的5’UTR提高目标蛋白表达水平； 3. 35S启动子表达草铵膦抗性； 试剂盒的使用方法： 试剂盒使用前引物的设计与合成 请按照如下格式设计引物oligo ： Gene-FP：5’-GCAAGTTCTTCACTGTTGATAATG- 目的基因正向PCR 扩增引物序 列 Gene-RP：5’-TGATTTCAGCGTACCGAATTGTTA- 目的基因反向PCR 扩增引物序 列 （TTA 为终止密码子，可换为其他终止密码子，如TCA，CTA） 使用方法： 注意：收到试剂盒后，使用前请离心试管，避免溶液残留管帽、管壁上。 步骤一：目标基因的PCR 用上述带有同源接头的引物，PCR 扩增目标基因的DNA 片段。PCR 结束后， 跑琼脂糖凝胶电泳，切胶回收目标PCR 产物，定量PCR 产物浓度，并将其按照 如下规则稀释（如目的PCR 产物大小为1kb，则稀释终浓度为10ng/μL，若目的 PCR 产物大小为2kb ，则稀释终浓度为20ng/μL，以此类推） 步骤二: 重组连接反应 1. 取一支EasyAssemblymix ，离心，避免液体残留在管盖、管壁上，放置在冰 上； 2. 取0.5μL 步骤一中的稀释过的PCR 产物与2μL 的Plant Transgenic Vector 于 EP 管中混合后，将2.5μL 混合液加入到一支Easy Assembly mix 管中, 轻匀 混合； 3. 立即置于50℃（建议在PCR 仪上进行），反应25 min 后，进行后续的E.coli 转化。 010-62963369