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生物化学实验指导 实验酶的特异性 【实验目的】 使用不同的底物，观察酶的特异性。 【实验原理】 酶对其底物具有高度的特异性唾液淀粉酶促进淀粉的水解而对蔗糖则无作用。淀粉受唾液淀粉酶作用水解为麦芽糖及一部分葡萄糖用班氏试剂检查结果。 麦芽糖及葡萄糖有自由的醛基，具有还原性，与班氏试剂反应，而蔗糖无自由醛基，无反应。 【器材】烧杯(100m1) 漏斗 锥形瓶 玻璃棒 小试管 试管架 试管夹滴管 水浴箱脱脂棉 2. 试剂 （1）班氏定性试剂： ①溶解17.3g结晶硫酸铜于100ml热水中，冷却之，稀释至150m1。 ② 溶解柠檬酸钠173g及纯无水碳酸钠100g于600ml热水中，冷却之，稀释至850m1，将①倾于②中，稀释至1000ml。 1％淀粉液(纯)。 1％蔗糖(须不含还原糖)。 【操作】 的收集：用水漱口，收集唾液约5ml，过滤备用。 取干净的大试管支按下表加样： 1 2 3 4 淀粉液 10滴 10滴 蔗糖液 10滴 10滴 唾液 5滴 5滴 置5支管于37℃水浴中10分钟。 以上各管均加班氏试剂10滴。 将上面5支管置沸水中3～5分钟，取出，各管有何变化?解释之并得出结论。 思考题淀粉管出现绿色，为什么?实验氧化酶法【实验目的】 掌握血糖测定的原理和操作方法 【实验原理】 葡萄糖+H2O+O2 葡萄糖酸+H2O2 H2O2+氨基安替比林+酚 + H2O 3. 用72-1型分光光度计测出红色化合物的光密度，再利用公式求出葡萄糖含量。【器材】试管微量移液器（10~50μl）吸量管5ml） 1支 水溶箱72-1型分光光度计试管架洗耳球1）甘油三酯标准液：mmol/L （2）酶试剂（2-8℃保存15个月，试剂空白吸光度大于0.2应弃去）【】 取3支干净试管，分别标明测定、标准和空白管，然后按下表加样： 加入物 测定管 标准管 空白管 血清（μl） 20 G标准应用液（μl） 20 蒸馏水（μl） 20 酶酚混合试剂（ml） 3.0 3.0 3.0 将样品混匀后，置37℃水浴中15，用分光光度计在波长505 nm（光径1cm），以空白管调零，分别读取各管吸光度值。 【】 计算公式： 血糖（mmol/L）= ×葡萄糖标准液浓度 参考值 空腹血糖为3.89～6.11mmol/L 【临床意义】 血糖浓度受神经系统和激素调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖。例如：肾上腺皮质功能亢进，垂体前叶功能亢进以及肾上腺素分泌增加等均可引起高血糖。反之，垂体前叶功能减退、肾上腺皮质激素分泌减少则均可引起低血糖。另外，严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，而使肝脏不能有效调节血糖浓度，也可引起低血糖。 实验【实验目的】 【实验原理】【器材】【】【临床意义】 实验血清胆固醇的测定CHOD-PAP法【目的】 掌握血清胆固醇测定的原理、方法和临床意义。 【原理】 胆固醇酯在胆固醇酯酶的催化下水解成胆固醇和脂肪酸，以胆固醇氧化酶氧化胆固醇，产生双氧水，然后以Trinder反应测定，从而求其含量。反应过程如下： 醌亚胺为红色物质，颜色深浅与双氧水浓度成正比，这一步反应称为Trinder反应。 【器材】试管 水浴箱 刻度吸量管微量移液器（μl）试管架胆固醇标准液（5.17mmol/L） 酶应用液（2~8℃保存18个月，试剂空白吸光度大于0.2应弃去） 【操作】 取3支干净试管，分别标明测定管、标准管和空白管，然后按下表进行加样操作。 加入物 测定管 标准管 空白管 待测血清（μL） 标准液（μL） 蒸馏水（μL） 酶应用液（mL） 20 2 20 2 20 2 混匀，置37℃水浴箱中保温分钟，用，在510nm处测定各吸管吸光度值，。【参考值】 2.33～5.70mmol/L【临床意义】 血清胆固醇浓度增高见于动脉粥样硬化，肾病综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿病。其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障及牛皮癣等血清胆固醇有增高。 在恶性贫血、溶血性贫血及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇降低，其他如感染和营养不良等情况下，胆固醇总量常见于降低。【附注】 1. 样品/试剂比例可在1/100~1/150之间任意选择，计算公式不变。 2. 试剂