[理化生]生物应用1.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 枯草芽孢杆菌孢子 a)处理前 b)CAP处理后 绿色和红色分别表示受作用和不受作用的 细菌膜（使用BacLight方法）。 等离子体源：He+O2等离子喷枪， 30KHz pulse BacLight方法： BacLight包含两种核酸结合染色剂SYTO 9? 和 propidium iodide， SYTO 9? 可以穿透所有细菌膜并将其染绿，而propidium iodide只通过受损的细胞膜进入细胞内部， 两种染色体的共同作用使细胞呈现红色荧光。 细胞膜(membrane)成分主要包括：脂多糖（LPS），磷脂，肽和膜蛋白质。CAP造成 细胞膜上一系列穿孔并引起细胞膜不可逆转的损伤，造成细胞的死亡，而没有改变细胞外 形。这些损伤将最终造成整个组织的死亡。 CAP也可以造成更强的细胞膜损伤，如下图所示，从严重破损到轻微外形损伤。这表明 2种CAP损伤，1，细胞快速死亡；2，不可逆转的物理结构、生物化学损伤造成的逐渐死 亡。 枯草芽孢杆菌孢子 a)处理前 b)CAP处理后 箭头所指为破损孢子。 生物膜(biofilm)：一些细菌会产生将自身包裹在内的胞外多糖基质，是自然界普遍存在的 生物形式。例如：潘托阿肠杆菌和变形链球菌（食品处理和牙科）。 生物膜可以形成一个抵挡等离子的物理盾牌，因而减弱了灭菌效果。这就需要等离子产 生的UV、RS、带电粒子的共同作用来产生效果。 在等离子口腔清洁和牙齿根管治疗中，细胞很容易堆积成千上万层。表层的细胞很容易 被CAP杀死，而形成底层细胞的盾牌。这正是现今研究的重点。 医院消毒 医院内常见的细菌，MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)和Clostridium difficile；现今常用的消毒手段是擦拭、洗涤和过氧化氢蒸汽。下图中的CAP设备显示了99.9999%的灭菌率。 细胞破裂 细胞质 泄露 MRSA 被MicroPlaSter device (右上角). 一个直径为5.3cm的清 洁区域。（等离子火炬和被处理物品·的间距是2cm,气体温度 30C)。 等离子消毒设备在医院使用的两大问题： 1） 增大等离子设备的尺寸来处理地板、墙面等。 2） 限制有害物质（Nox,O3等）的产量，可以在离病人较近 区域使用。 灭菌机理 CAP和原核细胞相互作用包括：1.等离子灭菌成分通过细胞组成和反应过程起作用(生 物机制）2.CAP发送到细胞上的灭菌成分（物理机制）。 生物机制比较复杂，例如，细胞膜的破裂可以归因为物理穿透或者对膜蛋白的氧化。 物理机制取决于工作气体的化学组成、等离子产生的时间空间点。 高频He+O2等离子体会产生O3、O和OH（氧化能不同）, 氧化细胞也取决于他们各自 的活性和浓度。 虽然高压脉冲会产生大量的高能电子和UV, N2也会产生大量UV.考虑到UV对正常组织 的损害，以及O通过扩散对手术器材小缝隙的消毒能力，目前还是以He+O2为主。 细胞电学模型 细胞间组织液(suspension) Cs和Rs组成(电导和介电常数）。 细胞膜：表面脂双层(Cm) +(并联)+开孔（电压电导 、击穿电压） +（串联）细胞质Rc 细胞电击穿参数 细胞膜(电容）充电时间 （细胞膜充电、电压升高） V为体积参数、ρ1为组织液阻抗、 ρ2为细胞质阻抗 10μm直径的人体细胞，τc75ns. 击穿电场 Vcr击穿电压，f细胞形状，τ脉宽 外加功率 K为固定系数， τ至少1.2倍于τc 细胞膜电崩解 细胞膜电穿孔 PEF引起细胞膜原有 小孔的增大，导致H2O 进入细胞内部。 大量电流流过蛋白质 通道(焦耳加热）引起 蛋白质通道的损伤。 细菌 消毒 水生物 处理 药物 投送 Gene 细胞 间电 操作 温度变化?Tcr控制在10K以内。 Vcr为细胞膜充电击穿的电压。 根据不同的脉冲电场强度和 脉宽有不同的处理对象。 脉冲放电的应用范围 在淡水河和海洋生态系统，不受控制的甲壳动物（附着船底），水螅和斑马 贻贝会造成大量问题 生物污染预防 无处理的情况下，会附着在表面上。 重复的 pulse 电压会保证每一定量的水 被电击，水中的生物会被“击晕”而暂时 失去活性，不会附着在表面上。 考虑到流速导致水生物在管道中0.5min的存在时间，通常选用0.77 μs 脉宽和 6-kV/cm的 电场。 美海军用1kV/cm的电场和1KW/h的电量，处理60 000加仑的水。 医学应用 电化学疗法 先将药物注入到肿瘤，再将电极埋入肿瘤，通上10-100?s和1kV的脉冲