[理学]第八章_细胞核与染色体上.ppt

(一)、实验证据 (1)用温和的方法裂解细胞核，将染色质铺展于电镜铜网上，通过电镜观察，未经处理的染色质自然结构为 30nm的纤丝，经盐溶液处理后解聚的染色质呈一系列核小体彼此连接的 “串珠状 ”结构，念珠的直径为 10nm。 (2)用非特异性微球菌核酸酶（ micrococcal nuclease）消化染色质时，经过蔗糖梯度离心及琼脂糖凝胶电泳分析，发现大多数 DNAA被降解成约 200bp的片段。如果部分酶解，则得到的片段是以 200bp为单位的单体、二体（ 400bp）、三体（ 600bp）等等。 (3)应用 X射线衍射、中子散射和电镜三维重建技术，研究染色质结晶颗粒，发现核小体颗粒是一个扁圆柱形，具有二分对称性。核心组蛋白是一个八聚体。 SV40微小染色体（ minichromosome）分析用 SV40病毒感染细胞，病毒 DNA进入细胞，与宿主的组蛋白结合，形成串珠状微小染色体，电镜观察到 SV40DNA为环状。 ①每个核小体单位包括200bp的DNA超螺旋和一个组蛋白八聚体及一个H1组蛋白 ②组蛋白八聚体构成核小体的盘状核心结构，两个H3、H4形成核心，两个H2A、H2B位于两侧。 ③146bp的DNA分子超螺旋盘绕组蛋白八聚体1.75圈, 组蛋白H1在核心颗粒外结合额外20bp DNA，锁住核小体DNA的进出端，起稳定核小体的作用。包括组蛋白H1和166bp DNA的核小体结构又称染色质小体。 ④两个相邻核小体之间以连接DNA相连，典型长度60bp，不同物种变化值为0～80bp ⑤组蛋白与DNA之间的相互作用主要是结构性的，基本不依赖于核苷酸的特异序列，实验表明，核小体具有自组装（self-assemble）的性质 ⑥核小体沿DNA的定位受不同因素的影响，进而通过核小体相位改变影响基因表达 染色质包装的多级螺旋模型 一级结构：核小体 二级结构：螺线管(solenoid) 三级结构：超螺线管(supersolenoid) 四级结构：染色单体（chromatid） 压缩7倍 压缩6倍 压缩40倍 压缩5倍 DNA———→核小体———→螺线管———→超螺线管———→染色单体 1、常染色质（euchromatin） 概念：指间期核内染色质纤维折叠压缩程度低, 处于伸展状态（典型包装率750倍）, 用碱性染料染色时着色浅的那些染色质。 DNA包装比约为1 000～2 000分之一 单一序列 DNA 和中度重复序列DNA(如组蛋白基因和tRNA基因) 并非所有基因都具有转录活性,常染色质状态只是基因转录的必要条件而非充分条件 概念：指间期核中，染色质纤维折叠程度高，处于聚缩状态，用碱性染料染色时着色较深的染色质组分。 ①在间期核中处于凝缩状态，无转录活性。 ②是遗传惰性区。 ③在细胞周期中表现为晚复制、早凝缩（异固缩现象）。 ④分为两类：①结构（恒定）异染色质（constitutive heterochromatin）②兼性（功能）异染色质（facultative heterochromatin） * 由X-射线晶体衍射(2.8A)所揭示的核小体三维结构（引自K.Luger等，1997） a。通过DNA超螺旋中心轴所显示的核小体核心颗粒8个组蛋白分子的位置；b．垂直与中心轴的角度所见到的核小体核心颗粒的盘状结构； c．半个核小体核心颗粒的示意模型，一圈DNA超螺旋（73bp）和4种核心组蛋白分子，每种组蛋白由3 个α螺旋和一个伸展的N-端尾部组成。 N-端尾部有序排列，参与核小体之间的相互作用，以形成螺线管等高级结构。 1、区域化作用 为细胞遗传信息的保存、复制、传递和对细胞代谢的控制提供了微环境，避免生命活动彼止干扰 保护DNA不受细胞骨架运动产生的机械力所伤 2、染色体和酶的定位 3、控制核质运输 新核膜来自旧核膜 核被膜的去组装是非随机的，具有区域特异性（domain-specific）。以非洲爪蟾卵提取物为基础的非细胞核装配体系提供了实验模型 核被膜的解体与重建的动态变化受细胞周期调控因子的调节，调节作用可能与核纤层蛋白、核孔复合体蛋白的磷酸化与去磷酸化修饰有关。 在真核细胞的细胞周期中，核被膜有规律地解体与重建。 在分裂期，双层核膜崩解成单层膜泡，核孔复合体解体，核纤层去装配。 到分裂末期，核被膜开始围绕染色体重新形成。 实验证明，在核被膜重建时，旧核膜参与了新核膜的重建。 大量证据表明有一种直径 200nm左右的单层小膜泡直接参与了核膜的形成。 （a）自由扩散； （b）协助扩散； （c）信号介导的核输入； （d） 信号介导的核输出