4 基因工程.ppt

（二）逆转录法 本法是应用得最多的获取目的基因的方法。但前提是目的基因的序列已知，至少部分已知。 选用富含目的基因mRNA的细胞作为实验材料，有利于分离到目的基因。如胰岛素基因的mRNA主要存在于胰腺组织，血红蛋白基因的mRNA占网质红细胞总mRNA的50%~90%。用此法得到的目的基因进行克隆可获得较完整的连续编码顺序，易在宿主细胞中表达及筛选。 第三节 分子克隆的基本步骤一、 目的基因的获取 （三）人工合成DNA片段 根据已知某种基因的核苷酸序列或某种基因产物的氨基酸序列，可推导出为该多肽编码的核苷酸短序列，再用DNA合成仪人工合成目的基因。此法适用于合成分子量较小的目的基因 （100bp以内），如：人生长激素释放因子、血管加压素、干扰素、胸腺素及胰岛素原的基因等。 第三节 分子克隆的基本步骤一、 目的基因的获取 人工合成基因的局限性 长度有限 密码子兼并性 二级结构影响拼接 费用较高 （四）直接从染色体DNA中分离目基因 根据染色体DNA的限制性内切酶图谱，用适当的限制性内切酶切割染色体DNA、分离目的基因。本方法较适用于制备原核生物目的基因，其原因为： （1）真核细胞染色体DNA有丰富的内含子，它们在原核细胞中转录后不能被剪接。 （2）真核细胞的基因多数为单拷贝，难以分离到足够量的目的基因。 第三节 分子克隆的基本步骤一、 目的基因的获取 ?