发酵液总糖含量测定法.doc

目的：对发酵液中总糖进行测定，来了解及控制抗生素的新陈代谢。 范围：车间化验室 责任：车间QC化验室化验人员及技术人员 化验原理：多糖类如淀粉等用HCl水解成单糖，单糖中的醛基在碱性溶液 中与铜盐作用，铜盐则还原成亚铜盐，此亚铜盐之量即代表糖之多少，本法测定之糖含量为每100ml原样中含有糖的毫克数。 程序 5.1 样品测试： 5.1.1样品过滤或离心，按估计糖的含量，糖含量小于3.0g/100ml稀释2倍，吸滤液0.5ml，糖含量大于3.0g/100ml，稀释4倍，吸滤液0.25ml于碘量瓶中。 5.1.2在碘量瓶中加入所吸好的滤液后，再加10ml3N的HCl置于电炉上煮沸水，解3分钟，取下冷却，然后加入5滴酚酞指示剂，再加3NNaOH进行中和，使溶液显红色。 5.1.3再加入10ml菲林试剂，再放于电炉上煮沸3分钟取下冷却。 5.1.4待冷却后加入4mol/LH2SO43.5ml，密塞振摇，用0.1N的Na2S2O3滴定至淡黄色，加入1%淀粉指示剂，再用Na2S2O3滴定至黄色消失。 5.1.5以水代替样品重复上述过程做空白，以空白的Na2S2O3消耗数减去样品的Na2S2O3消耗数之差，按其稀释倍数查表即得总糖含量。 5.2 标准曲线制备： 5.2.1取适量的无水葡萄糖置于105℃恒温烘箱干燥3小时，然后取出于干燥罐中冷却。 5.2.2取冷却后的葡萄糖5.0克溶于蒸馏水中，加水定容至100ml，摇匀，制成5%葡萄糖溶液。 5.2.3分别吸取上述标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml各分别加水0.9、0.8、0.7、0.6、0.5ml至100 ml碘量瓶中，将总量为1ml浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5g/100ml的各点标定样品。 5.2.4于碘量瓶中各加入10ml菲林试剂，然后置于电炉上煮沸水解3分钟，取下冷取。 5.2.5再加入4mol/L硫酸3.5ml密塞摇振，用0.1N的Na2S2O3进行滴定，以蒸馏水作空白，用空白减去样品滴定数作纵坐标，以糖含量作横坐标作一标准曲线图，再用列表法制出标准曲线法。 注意事项： 6.1 糖含量如果高于12.0g/100ml要进行适量稀释。 6.2 水解完成后，在充分冷却后才能进行滴定。 6.3 用3.0N氢氧化钠中和时，控制颜色变化，不可过量。 试剂配制 7.1 菲林试剂： 7.1.1称取硫酸铜150g加蒸馏水稀释，定容至2000ml，摇匀待用。 7.1.2酒石酸钾钠500g，氢氧化钠200g加水稀释，定容至2000ml，摇匀待用。 7.1.3碘化钾300g，用水稀释，定容至1000ml，摇匀待用。 7.1.4上述三种试剂按（7.1.1）：（7.1.2）：（7.1.3）=2：2：1体积比一次混合即可。 7.2 4mol/L硫酸溶液：量取200ml浓硫酸倒入蒸馏水中定容至1000ml。待冷取，摇匀即得。 7.3 1%可溶性淀粉液：称取1.0g可溶性淀粉，加少量水调成糊状，倒入煮沸的蒸馏水中搅匀，冷却后再加适量水定容至100ml即得。 7.4 3.0mol/L盐酸：以250ml浓盐酸用水稀释后定容至1000ml，摇匀即得 7.5 3.0mol/L氢氧化钠：称取120克氢氧化钠溶于蒸馏水中，再定容至1000ml摇匀即得。 7.6 0.1N硫代硫酸钠：本品由质检科统一配制。 标 准 管 理 规 程 STANDARD OPERATING PROCEDURE 发酵液总糖含量检查法 版本：2005版 生效日期：2005年 月 日 编号：SOP—QC—3005—00 制定： 审核： QA审核： 签发： 日期： 日期： 日期： 日期： 颁发部门：质量部 第一次复审日期：2007年 月 日 部门审核： QA审核： 签发： 第1页 共3页 标 准 操 作 规 程 STANDARD OPERATING PROCEDURE 发酵液总糖含量检查法 版本：2005版 生效日期：2005年 月 日 编号：SOP—QC—3005—00