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广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 各种膜分离法原理比较 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 七 色谱法 方法 P.C; TLC ; TSC 作用 分离混合物 精制化合物 鉴定化合物 背景 　色谱法是一种分离技术，它是俄国植物学家茨维特1906年创立的。分离植物叶子中的色素时，将叶片的石油醚（饱和烃混合物）提取液倒入装满CaCO3粉末的玻璃管中（CaCO3 有吸附能力)，用纯石油醚洗脱。 色谱分离法 色素受两种作用力影响 （1）一种是CaCO3 吸附，使色素 在柱中停滞下来； （2）一种是被石油醚溶解，使色 素向下移动。 各种色素结构不同，受两种作用力大小不同，经过一段时间洗脱后，色素在柱子上分开，形成了各种颜色的谱带，这种分离方法称为色谱法。 石油醚 CaCO3 色谱分离法 色谱法的产生 色谱分离结果 叶绿素? 叶绿素 叶黄素?， ? 叶黄素? 随着被分离样品种类的增多，该方法广泛地用于无色物质的分离，“色谱”名称中的“色”失去了原有的意义，但“色谱”这一名称沿用至今。 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 色谱种类 原理 硅胶(氧化铝)色谱 极性吸附 活性炭色谱 非极性吸附 聚酰胺色谱 氢键缔合 葡聚糖凝胶色谱 过筛和吸附 离子交换树脂 吸附 大孔树脂 过筛和吸附 纸色谱 分配 气相色谱 吸附或分配 高效液相色谱 吸附或分配 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 吸附色谱法 原理：吸附与解吸附 吸附剂：氧化铝、硅胶、聚酰胺 活性炭,纤维素等 操作方法： TLC：点样、展开、显色、Rf值计算 柱色谱：装柱、上样、洗脱、检测 ◆方法：TLC 基本操作： 1. 薄层板制备: (干法 , 湿法) 2. 点样 3. 展开 薄层色谱1.swf a b Rf= a b 原点 起始线 溶剂前沿 1 基本操作： 4. 定位 紫外灯下观察 喷雾显色 5. 计算Rf值 TLC 紫外下观察荧色空白黄连复方(三次)标准品 TLC定位 柱色谱 基本操作： 1.色谱柱制备 (干法 , 湿法) 2. 上 样 (干法 , 湿法) 3. 洗脱 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 分配色谱 （一） 原理： 固定相 流动相 正相色谱：固定相为亲水性溶剂，流动相为亲脂性溶剂 反相色谱：固定相为亲脂性溶剂，流动相为亲水性溶剂 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 分配色谱 （二）支持剂：无吸附作用 不溶于两相溶剂中 不与被分离成分反应 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 聚酰胺 属于氢键吸附 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 例: 吸附力大小 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 凝胶色谱法 葡聚糖凝胶（Sephadex G） 羟丙基化葡聚糖凝胶（Sephadex LH） 聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P） 琼脂糖凝胶（Sepharese, Bio-Gel A） 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 凝胶色谱法 原理：分子筛，分子量大的先流出， 分子量小的后流出。 极性吸附: 极性小的先流出. 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 广东药学院 Guangdong Pharmaceutical College 离子交换色谱 （一）原理 阳离子交换树脂 RSO3-H+ + Na+Cl- RSO3-Na+ + H+Cl- 阴离子交换树脂 RN+OH-