授课对象02级检验12班.doc

授课对象：06级检验1-5班 课 时：2学时 血清铁及总铁结合力测定（亚铁嗪比色法） 目 标： 1. 掌握亚铁嗪比色法测定血清铁的原理及注意事项 2. 规范地进行血清铁测定 3. 了解血清铁测定的主要临床意义 实验用品： 721型分光光度计、离心机、轻质MgCO3粉末、 甘氨酸/盐酸缓冲液、铁标准应用液、血清 内 容： 血清铁的测定有两大类：一类为全血铁测定，主要反映血红蛋白的含铁量，其意义与血红蛋白测定相同；另一类为血清铁测定。血清铁测定又分为两种：一种为血清铁测定，一种为血清总铁结合力测定。所谓血清总铁结合力是指可与血清运铁蛋白结合的铁的最大量。在正常情况下，血浆中的铁是与运铁蛋白结合形式运输的，而运铁蛋白通常只有约1/3被铁所结合，常有2/3未与铁结合。如果在血清中加入过量的铁，使血清中的运铁蛋白全部与铁结合，除去剩余铁后，再测定血清中铁的含量即为血清总铁结合力。血清总铁结合力与血清铁含量之差，称血清未饱和铁结合力。 由于血液中含有大量的血红蛋白，其中含有一定量的铁，故测定全血铁时，可采用灵敏度较低的硫氰酸盐显色。而血清（浆）中铁含量甚微，故测定血清（浆）铁时，必须采用灵密度高的有机显色剂。这些有机显色剂，只能与二价铁离子起反应，故测定过程中须选用适当的还原剂，使三价铁离子还原成二价的铁离子。 原理 血清铁和运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，在被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在波长562nm处有一吸收峰，与同样处理的标准液比较，即可求得血清铁含量。直接测定法应纠正血清本身的色度，故应设血清空白。 总铁结合力（TIBC）是指血清中的运铁蛋白全部与铁饱和。将铁标准液加到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合成复合物，多余的铁被轻质碳酸美粉末吸附除去，然后测定血清中的总铁含量，即为血清总铁结合力。 二、操作 1.血清铁直接测定法 取3支试管按下表操作。 加入物（ml） 测定管 标准管 空白管 血 清 0.45 — — 铁标准应用液 — 0.45 — 去 离 子 水 — — 0.45 甘氨酸/盐酸缓冲液 1.20 1.20 1.20 将各管混匀，以562nm波长比色，空白管调零，读取测定管的吸光度（称血清空白）。然后再向各管加入亚铁嗪显色液0.05ml，充分混匀，1小时后仍以562nm波长比色，空白管调零，读取各管的吸光度。 三、计算 由于两次测吸光度时溶液体积不同，故应将血清空白管吸光度乘以0.97，作为校正。 2.血清总铁结合力测定法 于一具塞试管中加入血清0.45ml，铁标准液（Fe179μmol/L）0.25ml和去离子水0.2ml，混匀，放置试温10分钟后，加碳酸镁粉末约20mg，再放10分钟，振摇数次，随后经2500r/min离心10分钟，上清液备用。另取3支试管，按下表操作。 血清总铁结合力测定操作步骤 加入物（ml） 测定管 标准管 空白管 离心上清液 0.45 — — 铁标准应用液 — 0.45 — 去 离 子 水 — — 0.45 甘氨酸/盐酸缓冲液 1.20 1.20 1.20 将各管混匀，以562nm波长比色，空白管调零，读取测定管的吸光度（称血清空白）。然后再向各管加入亚铁嗪显色液0.05ml，充分混匀，1小时后仍以562nm波长比色，空白管调零，读取各管的吸光度。 四、正常参考范围 血清铁 成年（男） 11~30μmol/L； 成年（女） 9~27μmol/L。 血清总铁结合力 成年（男） 50~77μmol/L； 成年（女） 54~77μmol/L。 五、附注 所用试剂要求纯度高，含铁量要很少。 所用之水必须经过离子处理。 由于血清铁含量极微，操作时必须注意防止铁的污染。玻璃器皿须用10%（V/V）盐酸浸泡24小时，取出后用去离子水冲洗干净方可用。 采血时应防止溶血，因红细胞内含铁远高于血清，即使有轻度溶血，也将大大影响结果的准确性。 六、临床意义 1.血清铁增高 见于因红细胞大量破坏的溶血性贫血；因红细胞再生或成熟障碍而导致的再生障碍性贫血、巨幼红细胞性贫血；因铁利用率太低的铅中毒或维生素B6缺乏引起造血功能低下，等等。 2.血清铁低下 常见于缺铁性贫血、急性或慢性感染、恶性肿瘤等。 3.血清总铁结合力增高 见于缺铁性贫血、急性肝炎等。 4.血清总铁结合力降低 见于肝硬化、肾病、尿毒症和色素沉着症等。 课后小结：