微生物接种、分离纯化与培养概要.ppt

项目六 接种、分离纯化与培养 学习目标 了解微生物的遗传和变异 熟悉微生物保藏的原理和方法 掌握微生物接种、分离与培养的方法 微生物的遗传和变异 衰退的原因 （2）分离现象 通过遗传育种获得的多核（或是单核）菌种，由于其DNA双链中仅一条单链发生突变，随着传代，其生产性状也将发生退化。这种退化是由于诱变获得的高产菌株本身不纯，高产突变只发生在一个核和一条DNA单链上，随着细胞分裂，核发生分离，因而突变基因与未突变基因发生分离，于是就出现了突变的高产菌株和未突变的低产菌株。 （3）环境条件 环境条件是影响菌种退化的一个重要原因。如培养条件对菌种退化的影响，可用糖化酶产生菌泡盛曲霉来说明。泡盛曲霉经诱变得到的突变株，在3种不同培养基上连续传代10次，发现不同培养基和传代次数对淀粉葡萄糖苷酶的产量有不同影响。环境温度也是影响菌种退化的重要因素，例如，温度高，基因突变率也高；温度低，则突变率也低，因此菌种保藏的重要措施就是低温。 （1）合理的育种 选育菌种时，应尽可能使用孢子或单核菌株，避免使用多核细胞；合理选择诱变剂的种类和剂量，以减少分离回复现象的发生；同时，在诱变处理后进行充分的后培养及分离纯化，以保证所获得的保藏菌种的纯度。这些可有效地防止菌种的退化。 （2）选择适合菌种生长的培养条件和外界环境 菌种培养基的培养条件应适宜，才能使菌种生长健壮，减少退化的发生。营养不足和过于丰富对菌种生长均不利。栖土曲霉3.942在培养时，发现培养温度从28～30℃提高到33～34℃，可防止它产孢子能力的退化。 此外，由于微生物生长过程积累的有害代谢产物，也会引起菌种退化，故不应使用陈旧的培养物作为种子培养。 （3）控制传代次数 由于微生物存在着自发突变，而突变都是在繁殖过程中发生而表现出来的，所以应尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，以减少发生自发突变的几率。菌种传代次数越多，产生突变的几率就越高，因而菌种发生退化的机会就越多。对于生产菌种，要尽可能利用它们的有效保藏期，可以采取一次接种足够数量的原种进行保藏，在整个保藏期内使用同一批原种。 （4）采用有效的菌种保藏方法 用于工业生产的一些微生物菌种，其主要性状都属于数量性状，而这类性状恰好是最容易退化的。因此，在实验室或生产上，选用合适的菌种保藏方法也可以有效防止菌种的退化。 （5）对菌种可能遭受病毒的感染应保持足够的警惕 对有疑问的菌种要及时检验，确定已感染病毒，尤其是病毒粒子含量大，菌丝体及子实体性状已受到严重影响的菌种，应及时淘汰。 退化菌种的复壮 　　菌种退化是指群体中退化细胞在数量上占一定优势后，所表现出群体性能变劣的现象。因此，在已经退化的群体中，仍有一定数量尚未退化的个体。 狭义的复壮是指在菌种已经发生退化的情况下，通过纯种分离和筛选，从已经退化的群体中筛选出尚未退化的个体，以达到恢复菌种的原有典型性状的措施。而广义的复壮是在菌种的典型特征或生产性状未退化前，就经常而有意识地进行纯种分离和生产性能的测定工作，以期从中选择到自发的正突变个体。由此可见，狭义的复壮是一种消极的措施，而广义的复壮才是一种积极的措施。具体的菌种的复壮措施如下： 　　　1．纯种分离法? 纯种分离法是指通过纯种分离和性能测定，从已经退化的菌种群体中把仍保持原有典型优良性状的个体分离出来。在进行纯种分离前，可将待分离的退化菌种先接触一些恶劣环境，如药物、低温、高温等，往往可以起到淘汰生活力弱、留下强壮菌株的作用，因而能提高纯种分离的效果。 　　　2．通过宿主进行复壮? 对于一些寄生型微生物，特别是一些病原菌，长期在实验室人工培养会发生致病力降低的退化。可将退化菌株接种到相应宿主体内以提高菌株的活力。 　　　3．淘汰已退化的个体 有人发现，若对细黄链霉菌“5406”农用抗生素的分生孢子采用-10～-30℃的低温处理5～7d，使其死亡率达到80%左右。结果会在抗低温的存活个体中留下未退化的个体，从而达到了复壮的效果。 菌种保藏 原理：根据不同菌种的生理、生化特点，创造条件使菌体的代谢活动处于休眠状态 方法：首先要挑选优良纯种、休眠体，其次创造良好的环境条件（干燥、低温、缺氧、缺乏营养、添加保护剂、酸度中和剂） 三、菌种保藏的方法 斜面培养基接种法 原理：主要用于接种纯菌，使其增殖后用于鉴定或保存菌种，可以挑取平板培养基上的纯培养物‘或挑取斜面、肉汤中的纯培养物按无菌操作的要求接种到斜面培养基上，是