CN107356744-CN201710568652-一种循环肿瘤细胞分选和或富集的方法及其试剂盒.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107356744 A (43)申请公布日 2017.11.17 (21)申请号 201710568652.9 (22)申请日 2017.07.13 (71)申请人 珠海丽珠圣美医疗诊断技术有限公 司 地址 519020 广东省珠海市南屏科技工业 园屏东六路8号五楼505A (72)发明人 唐东江　范献军　陈林　任堂雨　 林上炎　 (74)专利代理机构 北京泛华伟业知识产权代理 有限公司 11280 代理人 李渤　郭广迅 (51)Int.Cl. G01N 33/543(2006.01) G01N 33/577(2006.01) 权利要求书2页 说明书9页 (54)发明名称 一种循环肿瘤细胞分选和/或富集的方法及 其试剂盒 (57)摘要 本发明提供了一种循环肿瘤细胞的分选和/ 或富集的方法，本发明提供的方法利用生物素标 记的抗Her2单克隆抗体、生物素标记的抗EpCAM 单克隆抗体和生物素标记的抗Trop2单克隆抗体 与亲和素包被的磁珠之间极高且稳定的亲和力， 提供了一种免疫磁珠方法来分选和/或富集循环 肿瘤细胞。本发明还提供了一种用于肿瘤细胞分 选和/或富集的试剂盒。本发明的方法可以灵敏 地捕获肿瘤细胞，适用于肿瘤细胞的广谱性筛 选，并且克服了普通磁珠筛选的位阻效应缺陷， 达到高效捕获肿瘤细胞的效果。 A 4 4 7 6 5 3 7 0 1 N C CN 107356744 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种循环肿瘤细胞分选和/或富集的方法，所述方法包括以下步骤： 1)使用生物素标记抗Her2(人表皮生长因子受体2)单克隆抗体、抗EpCAM(上皮细胞粘 附分子)单克隆抗体和抗Trop2(人滋养层细胞表面抗原2)单克隆抗体，并将其混合； 其中，三种单克隆抗体混合后的质量百分比范围为： 生物素标记的抗Her2单克隆抗体20-40％； 生物素标记的抗EpCAM单克隆抗体10-25％； 生物素标记的抗Trop2单克隆抗体40-60％； 2)将步骤1)得到的混合物加入到待分选的细胞液中； 其中，所述混合物与细胞液的体积比为1～5:1000； 3)加入链霉亲和素偶联的磁珠，在4℃孵育20分钟，收集磁珠，即得； 其中，所述待分选的细胞液与磁珠的体积比是1000:10～30。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述三种单克隆抗体混合后 的质量百分比范围为： 生物素标记的抗Her2单克隆抗体35％； 生物素标记的抗EpCAM单克隆抗体20％； 生物素标记的抗Trop2单克隆抗体45％； 优选地，在步骤2)中，所述混合物与细胞液的体积比为2～3:1000； 优选地，在步骤3)中，所述待分选的细胞液与磁珠的体积比为1000:20。 优选地，所述肿瘤选自乳腺癌、食道癌、非小细胞肺癌、子宫颈癌、结肠癌、胃癌、子宫癌 和/或鼻咽癌。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述三种生物素标记的单 克隆抗体分别通过包括以下步骤的方法制备： a.使用超滤柱纯化抗体溶液； b.加入NHS-PEG4-Biotin溶液，在室温下反应0.5～4h； 其中，NHS-PEG4-Biotin与抗体的摩尔浓度比例为10-50:1； 优选地在室温下反应0.5-3h；更优选地在