CN107365376-CN201710638130-一种鹿血清蛋白的提取方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107365376 A (43)申请公布日 2017.11.21 (21)申请号 201710638130.1 (22)申请日 2017.07.31 (71)申请人 天津市正江现代生物技术有限公司 地址 300000 天津市北辰区经济开发区内 双原道12号 (72)发明人 陈燕　 (51)Int.Cl. C07K 14/765(2006.01) C07K 1/34(2006.01) 权利要求书1页 说明书2页 (54)发明名称 一种鹿血清蛋白的提取方法 (57)摘要 本发明提供了一种鹿血清蛋白的提取方法， 其包括，选取制备无菌马鹿血浆，离心分离鹿血 清溶液，加热提取鹿血清蛋白，第一次透析纯化， 第二次阴离子交换层析纯化，最后进行脱盐浓 缩，过滤除菌。本发明工艺流程短，操作简单，生 产效率高，且本发明中无有机溶剂的使用，避免 了蛋白发生聚集或变性，同时可减少对环境的污 染和生产过程中的不安全因素，提高了产品纯 度，使其能够广泛地应用医疗、生化等领域。 A 6 7 3 5 6 3 7 0 1 N C CN 107365376 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种鹿血清蛋白的提取方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)用无菌取血袋抽取健康马鹿动脉血液，加入原血量体积10％抗凝剂，病毒检测及灭 活处理，确保血液中无细菌病毒； (2)取处理后的血液，在4℃下以2500rpm转速离心10min，取上清于灭菌袋中，置于-20 ℃条件下冷冻，取出冷冻的血清，在室温下充分融化后，以10000rpm转速离心10min，取上清 即为马鹿血清，置于灭菌袋中； (3)用无菌针管抽取所述马鹿血清于无菌双层反应釜中，加入生理盐水稀释，加入稳定 剂，再加入1mol/L的盐酸将溶液pH值调至5.1～5.2，水浴加热，使反应釜内溶液的温度保持 在65～75℃，反应持续60～80min，过滤后，收集滤液； (4)取所述滤液，用0.02mol/L的Tris-HCl缓冲溶液于4℃透析，透析袋截留分子量为 20000； (5)取透析过后的组分液，使用阴离子交换层析进一步纯化，使用0.2mol/L浓度氯化钠 进行梯度洗脱； (6)取洗脱过后的组分液，进行脱盐浓缩，浓缩后的洗脱液使用灭菌后过滤器进行过滤 除菌，过滤孔径为0.1um； (7)将除菌过滤后的溶液进行冷冻干燥，即得到马鹿血清蛋白冻干粉。 2.根据权利要求1所述的一种鹿血清蛋白的提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述抗 凝剂为4％的柠檬酸钠溶液。 3.根据权利要求1所述的一种鹿血清蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤(2)中生 理盐水与牛血清的体积比为1:2。 4.根据权利要求1所述的一种鹿血清蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤(2)中的 稳定剂为软脂酸钠。 5.根据权利要求1所述的一种鹿血清蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤(2)中稳 定剂按每100ml牛血清中加入0.7g的量加入。 6.根据权利要求1所述的一种鹿血清蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤(4)中阴 离子交换层析的填料为DEAE—纤维素。 2 2 CN 107365376 A 说　明　书 1/2页