CN107365875-CN201710653016-定量检测重组慢病毒的滴度的方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107365875 A (43)申请公布日 2017.11.21 (21)申请号 201710653016.6 (22)申请日 2017.08.02 (71)申请人 深圳精准医疗科技有限公司 地址 518000 广东省深圳市南山区科园路 1008号软件产业基地1栋裙楼4层04、 06号室 (72)发明人 易吉辉　熊霞辉　刘恒　李扬兮　 许春莲　毛侃琅　 (74)专利代理机构 广州华进联合专利商标代理 有限公司 44224 代理人 徐春祺 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/68(2006.01) C12R 1/93(2006.01) 权利要求书2页 说明书10页 序列表2页 附图6页 (54)发明名称 定量检测重组慢病毒的滴度的方法 (57)摘要 本发明涉及一种定量检测重组慢病毒的滴 度的方法，先用待测样品感染靶细胞，并提取感 染后靶细胞中的基因组DNA，然后测定基因组DNA 中WPRE元件的拷贝数以及hTERT基因的拷贝数。 根据WPRE元件的拷贝数和hTERT基因的拷贝数计 算平均每个靶细胞中重组慢病毒的颗粒数。之后 根据靶细胞的总数和平均每个靶细胞中重组慢 病毒的颗粒数计算单位体积的待测样品中含重 组慢病毒的颗粒数，即得到待测样品中重组慢病 毒的滴度。上述定量检测重组慢病毒的滴度的方 法操作简便，能够在不借助荧光标记物的条件下 准确定量测定重组慢病毒的滴度。 A 5 7 8 5 6 3 7 0 1 N C CN 107365875 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种定量检测重组慢病毒的滴度的方法，其特征在于，包括以下步骤： 用待测样品感染靶细胞，并提取感染后所述靶细胞中的基因组DNA，其中所述待测样品 中含有重组慢病毒； 测定所述基因组DNA中WPRE元件的拷贝数以及hTERT基因的拷贝数； 根据所述WPRE元件的拷贝数和所述hTERT基因的拷贝数计算平均每个靶细胞中重组慢 病毒的颗粒数，其中，平均每个靶细胞中重组慢病毒的颗粒数＝(所述WPRE元件的拷贝数/ 所述hTERT基因的拷贝数)×2；及 根据所述靶细胞的总数和所述平均每个靶细胞中重组慢病毒的颗粒数计算单位体积 的所述待测样品中含重组慢病毒的颗粒数，得到所述待测样品中重组慢病毒的滴度。 2.根据权利要求1所述的定量检测重组慢病毒的滴度的方法，其特征在于，所述测定所 述基因组DNA中WPRE元件的拷贝数以及hTERT基因的拷贝数的步骤包括： 将所述基因组DNA与WPRE元件上游引物以及WPRE元件下游引物混合进行实时荧光定量 PCR扩增反应，获取扩增所述WPRE元件的Ct值； 将所述基因组DNA与hTERT基因上游引物以及hTERT基因下游引物混合进行实时荧光定 量PCR扩增反应，获取扩增所述hTERT基因的Ct值； 将扩增所述WPRE元件的Ct值带入由WPRE元件标准品建立的标准曲线中，获得所述基因 组DNA中所述WPRE元件的含量； 将扩增所述hTERT基因的Ct值带入由hTERT基因标准品建立的标准曲线中，获得所述基 因组DNA中所述hTERT基因的含量；及 根据所述WPRE元件的含量计算所述基因组DN