CN107478820-CN201710584396-用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107478820 A (43)申请公布日 2017.12.15 (21)申请号 201710584396.2 (22)申请日 2017.07.18 (71)申请人 中国科学院苏州生物医学工程技术 研究所 地址 215163 江苏省苏州市高新区科技城 科灵路88号 (72)发明人 田晶晶　尹焕才　 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理 事务所(普通合伙) 11369 代理人 韩飞 (51)Int.Cl. G01N 33/531(2006.01) 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (54)发明名称 用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备 方法 (57)摘要 本案涉及一种用于检测孢子丝菌病的血清 凝集剂的制备方法，包括：取出培养的孢子丝菌 酵母相，离心去上清；加入-20℃预冷的预固化 液，混匀，置于4℃中反应0.5-2小时；在4℃下离 心，去上清，加入2-4％多聚甲醛，混匀后在4℃下 固定保存过夜；加入0.1-0.5％ TritonX-100、 0.5-1％ BSA、5-10％的蛋白保护剂和0.02- 0.05％的ProClin300，混匀；加入染色剂，反应 10-20min后，离心去上清，以PBS缓冲液稀释得血 清凝集剂；预固化液中包括有乙二醇和甘油磷酸 酯。本案无需仪器、成本低、快速、操作简便、结果 A 直观，尤其适合基层医疗机构的检测应用，具有 0 广泛的应用价值。 2 8 8 7 4 7 0 1 N C CN 107478820 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法，其特征在于，包括： 1)培养孢子丝菌酵母相； 2)取出培养的孢子丝菌酵母相，用PBS缓冲液离心洗涤，去除上清； 3)向洗涤后的孢子丝菌酵母相中加入-20℃预冷的预固化液，混匀，置于4℃中反应 0.5-2小时；随后在4℃下离心，去除上清，加入2-4％多聚甲醛，震荡混匀后，在4℃下固定保 存过夜； 4)加入0.1-0.5％TritonX-100、0.5-1％BSA、5-10％的蛋白保护剂和0.02-0.05％的 ProClin300，混匀； 5)加入染色剂，反应10-20min后，离心去上清，以PBS缓冲液稀释，获得血清凝集剂； 其中，所述预固化液中至少包括有乙二醇和甘油磷酸酯。 2.根据权利要求1所述的用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法，其特征在于， 所述预固化液中还包括有乙醇。 3.根据权利要求1所述的用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法，其特征在于， 所述乙二醇和甘油磷酸酯的质量比为10-15∶2-3。 4.根据权利要求2所述的用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法，其特征在于， 所述乙二醇、甘油磷酸酯和乙醇的质量比为10-15∶2-3∶100。 5.根据权利要求1所述的用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法，其特征在于， 所述蛋白保护剂包括有甘油和氯化钾。 6.根据权利要求5所述的用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法，其特征在于， 所述蛋白保护剂中，甘油和氯化钾的质量比为100∶5-8。 7.一种如权利要求1-6中任一项所述的制备方法所制得的血清凝集剂。 2 2 CN 107478820 A