细胞内酸性蛋白质和碱性蛋白的显示.ppt

实验二 细胞组分的化学 反应 新疆医科大学基础医学院生物学教研室 代课老师：纳菲沙·卡德尔 2012年9月 一、实验目的 1．掌握Brachet 反应的原理与方法。 2．了解蛋白质、核酸的细胞化学反应原理。 3.了解细胞内DNA 、RNA、酸性蛋白质、碱性蛋白质等成分的分布。 * 血涂片的制备 30°~45° 二、实验原理 细胞的组织化学方法是研究细胞 成分的常用方法之一。它是利用化学试剂与细胞内的物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜观察，对细胞内生物化学成分进行定性、定位、定量研究。 三.实验内容与方法 1.实验内容 （1）细胞内酸性蛋白质和碱性蛋白的显示。 （2 ）Brachet 反应--显示细胞内DNA 和RNA。 Materials 1.microscope,slide,absorbent tissue, tweezers,dyeing urn,wax pencil,pipette,water bath,small beaker,lotion bottle,waste bottle,colored pencil; 2.70% ethanol,tricholoroacetic acid,acidic fast green,alkaline fast green; An amino acid is defined as the molecule containing an amino group (NH2), a carboxyl group (COOH) and an R group.? It has the following general formula: R-CH(NH2)-COOH The R group differs among various amino acids.? In a protein, the R group is also called a?sidechain. Building Blocks of Protein - Amino Acids the structure of tyrosine 1 .实验方法 每人制备一张血涂片，晾干，正面（涂血液的面）做标记。 将涂片放在70%乙醇中浸5min，室温晾干。 放入60度5%三氯醋酸中处理30min。 实验方法 显示酸性蛋白的涂片用自来水冲洗3min以上，用滤纸吸干玻片上水分，用蜡笔在涂有标本出的两侧划线，框出染色部位。 显示酸性蛋白的涂片用0.1%酸性固绿染色7min，蒸馏水冲洗晾干。 显示碱性蛋白的涂片用自来水冲洗一下，用滤纸吸干玻片上水分，用蜡笔在涂有标本出的两侧划线，框出染色部位。 显示碱性蛋白的涂片用1%碱性固绿染色50min，蒸馏水冲洗晾干； 两片分别在显微镜下观察。 实验方法 细胞内的酸性蛋白 细胞内的酸性蛋白 细胞内的酸性蛋白 细胞内的碱性蛋白 细胞内的碱性蛋白 细胞内的碱性蛋白 Principle If cells are stained with a mixture of methyl green and pyronine, DNA has selectively stronger affinity with methyl green, thus showing blue colour. While RNA has affinity with pyronine, showing red colour. So we can determine the location of DNA and RNA in the cell. 2.细胞内DNA和RNA的显示 血涂片放入70%乙醇5分钟 用玻璃铅笔框住染色部位 用甲基绿——派咯宁染色30 分钟 用蒸馏水冲洗3次 放入丙酮内分色2-3秒 放入丙酮二甲苯混合液内分色5秒 放入二甲苯透明5分钟 Brachet 反应