分子发光分析作者lizhiying.PPT

c 镜像对称 通常荧光光谱与吸收光谱呈镜像对称关系。 图5.3 荧光光谱与吸收光谱关系图 解释1：能层结构相似性 荧光为第一电子激发单重态的最低振动能层跃迁到基态的各个振动能层而形成，即其形状与基态振动能级分布有关。 吸收光谱是由基态最低振动能层跃迁到第一电子激发单重态的各个振动能层而形成，即其形状与第一电子激发单重态的振动能级分布有关。 S1 S0 图5.4 能层结构 由于激发态和基态的振动能层分布具有相似性，因而呈镜像对称。 解释2：位能曲线(Frank-Condon原理) 由于电子吸收跃迁速率极快(10-15s)，此时核的相对位置可视为不变(核较重)。当两个能层间吸收跃迁的几率越大，其相反跃迁的几率也越大，即产生的光谱呈镜像对称。 图5.5 位能曲线 三、荧光仪器(光源与检测器处于相互垂直的位置) 第一单色器 或滤光片 记录仪 第二单色器 或滤光片 荧光 光源 激发 样品池 1)光源： 氙灯、高压汞灯、激光； 2)样品池：石英(低荧光材料)； 3)两个单色器：选择激发光单色器,分离荧光单色器； 4)检测器：光电倍增管。 图5.6 荧光分析仪器示意图 四 荧光分析法的应用 该式只有当c0.05时才成立,即荧光测定必须在极稀的溶液中才可用于定量测定,否则较正曲线发生弯曲. (一)无机化合物的分析 大多数无机离子与溶剂之间的相互作用很强,其激发态多以非辐射跃迁方式返回基态,发荧光者甚少.然而很多无机离子可以与一些有机化合物形成有荧光的络合物,利用这一性质可对其进行荧光测定.能够同金属离子形成荧光络合物的有机试剂绝大多数是芳香族化合物,通常含有两个或两个以上的官能团,能与金属离子形成五元环或六元环的螯合物.由于螯合物的生成,分子的刚性平面结构增大,使原来不发荧光或荧光较弱的化合物转变为强荧光化合物. 另一类络合物是三元离子缔合物. (二)有机化合物的分析 脂肪族有机化合物的分子结构较为简单,本身能发生荧光的很少,一般需要与某些试剂反应后才能进行荧光分析,如丙三醇与苯胺在浓硫酸介质中反应生成发射蓝色荧光的喹啉，据此可以测定0.1~2μg?mL?1的丙三醇. 芳香族化合物因具有共轭的不饱和体系,多数能发生荧光,可直接用荧光法测定. 第二节 磷光分析 一、概述 磷光分析法是以分子磷光光谱来鉴别有机化合物和进行定量分析的一种方法. 磷光分析法在药物分析,临床分析等领域的应用日益发展. * 第五章 分子发光分析 (Molecular Luminescence Analysis) 化 学 发 光 分 析 法 荧 光 分 析 法 磷 光 分 析 分子发光：处于基态的分子吸收能量(电、热、化学和光能等)被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回 至基态并发射出光子，此种现象称为发光。发光分析 包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等。 物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光。 第一节 荧光分析法 一、概述 分子荧光分析法是根据物质的分子荧光光谱进行定性，以荧光强度进行定量的一种分析方法。 荧光分析的特点： 灵敏度高：视不同物质，检测下限在0.1?0.001?g/mL之间。可见比UV-Vis的灵敏度高得多。 选择性好：可同时用激发光谱和荧光发射光谱定性。 结构信息量多：包括物质激发光谱、发射光谱、光强、荧光量子效率、荧光寿命等。 应用不广泛：主要是因为能发荧光的物质不具普遍性、增强荧光的方法有限、外界环境对荧光量子效率影响大、干扰测量的因素较多。 二、基本原理 (一) 分子荧光的产生 处于分子基态单重态中的电子对，其自旋方向相反，当其中一个电子被激发时，通常跃迁至第一激发态单重态轨道上，也可能跃迁至能级更高的单重态上。这种跃迁是符合光谱选律的，如果跃迁至第一激发三重态轨道上，则属于禁阻跃迁。单重态与三重态的区别在于电子自旋方向不同，激发三重态具有较低能级。 在单重激发态中，两个电子平行自旋，单重态分子具有抗磁性，其激发态的平均寿命大约为10-8s; 而三重态分子具有顺磁性，其激发态的平均寿命为10-4 ~ 1s以上(通常用S和T分别表示单重态和三重态)。 基态：电子自旋配对， 多重度=2s+1=1，为单 重态，以S0表示。 激发单重态：分子吸收能 量，电子自旋仍然配对， 为单重态，称为激发单 重态，以S1，S2…表示 激发三重态：分子吸收能 量，电子自旋不再配对， 为三