生物技术实验内容z.ppt

几个强调的注意事项： 1. 组长负责制：实验前后务必检查清点实验器材、标本(永久制片)的数量及质量。老师检查后组长才可离开。 2. 严格执行操作程序，爱护公物。 3. 不要往水池内丢弃杂物。 4. 值日。 实验内容 实验一、特殊显微镜的使用 实验二、细胞的形态结构与显微测量 实验三、Brachet反应－显示DNA和RNA 实验四、酶细胞化学 实验五、细胞生理活动的实验观察 实验六、细胞核与线粒体的分级分离 实验七、细胞分裂的形态观察 实验八、细胞原代培养 实验九、细胞计数及死活细胞的鉴定 实验十、细胞显微摄影 实验一 特殊显微镜的使用 实验目的 熟悉荧光显微镜的原理、用途和使用方法。 实验原理 某些物质受紫外线照射时可发出荧光，这种物质称荧光物质。细胞内含有少数天然荧光物质，经紫外线照射后可自发荧光。还有些细胞成分虽然受照射后不发荧光，但可以与某些荧光物质结合，经紫外线照射后可诱发荧光。荧光显微镜就是根据这一现象而设计的显微放大装置，可以观察到这些荧光物质在细胞内的分布位置。 实验用途 1、观察活细胞内物质的吸收与运输，化学物质的分布与定位等。 2、利用免疫荧光显微技术，对细胞内的特异成分进行精确定位研究。 3、与分光光度计结合构成的显微分光光度计，可对细胞内物质进行定量分析 使用方法 1、开启电源 打开电源开关，当电压表的指针稳定在220v时再进行下一步操作。 启动高压汞灯。 待10min左右汞灯稳定状态后，再进行操作。 2、调中光轴 将灯前镜摆出光路。 用滤光组的2、3、4中任一组。 放一张标本片在载物台上，选25倍物镜，调焦到成像。 关小视场光圈，调凸镜调节杆到光圈在标本平面上面成像。 调节聚光器调中钮至光圈图像居中，然后回复光圈到与视野等大。 3、调中光源 将灯前镜摆入光路。 拨动灯前镜调焦杆，使灯影光斑清晰。 先调节灯泡调中钮，到灯影光斑居中，再调节反射镜调中钮，到反射影光斑居中。 最后将灯前镜摆出光路，即可正常使用。 实验二细胞的形态结构与显微测量 几个强调的注意事项： 1. 组长负责制：实验前后务必检查清点实验器材、标本(永久制片)的数量及质量。老师检查后组长才可离开。 2. 严格执行操作程序，爱护公物。 3. 不要往水池内丢弃杂物。 4. 值日。 (一) 观察并了解细胞的基本形态。 (二)掌握临时制片和显微绘图的方法。 (三)了解显微测微尺的原理及使用方法 (一)材料： 人口腔上皮细胞(自取) 鸡血细胞永久制片 单层立方上皮细胞永久制片 单层柱状上皮细胞永久制片 骨骼肌纵切片 (二)器材： 载玻片 盖玻片 牙签 擦镜纸 吸水纸 纱布 永久制片 镜台测微尺 (一)临时制片——口腔上皮细胞标本的制备 取载玻片一张(揩净)→加一滴生理盐水→取材(口腔内颊部上皮细胞)→涂于生理盐水中→盖盖玻片→染色(甲基蓝)1’→观察 (二)显微测量 1．显微测量计 (1) 目镜测微尺 1.外形是一圆形玻片，装入目镜镜筒中。 用于测量标本用。 2.刻度标记0~100，实际分为200等份，每一个格的长度需用镜台测微尺标定。 (2) 镜台测微尺 1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。 2.总长度为1mm，分为100等份，每一个格的长度为0.01mm(10μm)。 (3)标定方法 ①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且左端对齐(0刻度重合)。 ③由左向右找到目镜测微尺与镜台测微尺重合的位点，分别记录两尺重合处的刻度，计算目镜测微尺每小格的长度。 (4)测量细胞并计算核质比 ①口腔上皮细胞标本片→低倍镜下选无重叠、伸展良好、结构完整的细胞→换高倍镜测量。 ②口腔上皮细胞为扁平形(近似椭圆形), 测细胞的长半径(直径)，短半径(直径)，计算细胞体积。以同样方法测核并计算核体积(或将核近似看作球形)。 ③按公式计算核质比。 (三)永久制片的观察 鸡血细胞涂片 单层立方上皮细胞 单层柱状上皮细胞 骨骼肌纵切片 四、作业 1．绘制口腔上皮细胞(点线绘图法) 2．低倍镜、高倍镜下测微尺的标定方法及结果 3．计算核质比 实验三Brachet反应－显示DNA和RNA 1、了解核酸的细胞化学反应原理 2、熟悉细胞内DNA和RNA的分布 3、掌握Brachet反应及血涂片的制作方法 实验用品 1、材料和标本：蟾蜍。 2、器材和仪器光学显微镜、剪刀、镊子、注射器、载玻片、吸水纸、染色缸、盖片。 3、甲基绿－派洛宁醋酸缓冲液、70％乙醇、95％乙醇、蒸馏水。 实验内容 （一）原理 细胞经甲基绿－派洛宁混合液处理后，其中