在DNA聚合酶的作用下.PPT

高频考点例析 (一)DNA分子的提取和分离 (1)在提取菜花细胞中的DNA时，采用的是研磨法，为什么不能像用鸡血那样，用蒸馏水使其破裂？ (2)在提取实验过程中用到两种浓度的NaCl溶液，说明其作用： ①2 mol/L NaCl溶液：____________； ②0.14 mol/L NaCl溶液：__________。 * 基础知识梳理 一、血红蛋白的提取和分离 1．凝胶色谱法：也称 ，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 2．电泳 (1)概念：电泳是指 在电场的作用下发生迁移的过程。 分配色谱法 带电粒子 基础知识梳理 (2)特点：电泳利用待分离样品中各种分子 的差异以及分子本身的大小、 的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 带电性质 形状 基础知识梳理 3．实验操作 (1)样品处理：通过红细胞的洗涤、 、离心等操作收集到血红蛋白溶液。 (2)粗分离：通过透析去除血红蛋白溶液中的 较小的杂质。 (3)纯化：通过 分离相对分子质量不同的蛋白质。 (4)纯度鉴定：用 进行样品纯度鉴定。 搅拌 相对分子质量 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 凝胶色谱法 基础知识梳理 二、PCR技术扩增DNA片段 1．PCR技术 (1)PCR： 的简称，是一种体外迅速扩增 的技术。 (2)扩增方向：总是从子链的5′端向 端延伸。 多聚酶链式反应 DNA片段 3′ 基础知识梳理 (3)引物特点：是一小段 或DNA，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对，用于PCR的引物长度通常为 个核苷酸。 (4)原理： 原理。 (5)条件：DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种 ，四种脱氧核苷酸、耐热的 ，同时控制温度。 RNA 20～30 DNA复制 引物 DNA聚合酶 基础知识梳理 2．过程 (1)变性：当温度上升到 以上时，双链DNA解旋为单链。 (2)复性：温度下降为50 ℃左右时，两种 通过碱基互补配对与 结合。 (3)延伸：当温度上升到72 ℃左右时，四种脱氧核苷酸在 的作用下，根据 原则合成新的DNA链。 90 ℃ 引物 两条单链DNA DNA聚合酶 碱基互补配对 基础知识梳理 3．结果：DNA聚合酶只能特异性地复制处于 序列，使这段固定长度的序列呈 扩增。 两个引物之间的DNA 指数 核心要点突破 一、DNA的粗提取与鉴定 1．基本原理 (1)血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得含核DNA的溶液。 (2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。 (3)DNA不溶于酒精溶液；不被蛋白酶所水解；可被二苯胺染成蓝色。 核心要点突破 2．方法目的 方法 目的 溶于NaCl溶液中并稀释 (1)NaCl溶液物质的量浓度为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 (2)当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质 加入冷却酒精(95%) DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 加入二苯胺，并沸水浴 鉴定DNA 核心要点突破 (1)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。 (2)预冷的酒精溶液具有以下优点 ①抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解。 ②降低分子运动易于形成沉淀析出。 ③低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。 核心要点突破 【易误警示】　本实验用鸡血细胞作实验材料，不能用哺乳动物的成熟红细胞，原因是哺乳动