基础试验-清华大学出版社.PDF

基础实验 （实验1～实验20 ） 实 验 1 1 植物染色体常规压片技术及核型分析 一、实验目的 1．学习植物材料的固定方法和常规压片技术。 2．观察有丝分裂过程中染色体的动态变化。 3．掌握核型分析的原理和方法。 二、实验原理 一般认为，生命的特征为具有自我复制能力。单细胞生物通过细胞分裂而增殖，而对 于多细胞生物体来说，其由受精卵开始的生长发育以及正常生命活动中的细胞更新都依赖 于有丝分裂。正是由于人们在 19 世纪逐渐了解了细胞分裂的知识，才能够对孟德尔定律有 比较深刻的认识。而细胞在进行有丝分裂的过程中，遗传物质的复制与传递是人们最为关 心的。通过研究细胞分裂过程中染色体的变化，人们对于遗传因子 （genetic factor ）的认识 更为深刻。［1 ］ 理论上只要能够进行细胞分裂的细胞都可以作为观察染色体的材料，但考虑到具体实验 所需，我们通常选取一些易于取材与操作，细胞分裂旺盛的组织，比如植物的顶端分生组织 （根尖和茎尖）、居间分生组织 （禾本科植物的幼茎及叶鞘）、愈伤组织和胚乳、萌发的花粉 管等作为观察有丝分裂染 ［2 ］ 色体的材料。 细胞遗传学中观察染色体变化最基本最常用的方式 即寻找适于实验的材料，进行取材，并经固定、离析、染色等处理后制成染色体玻片标本， 即可利用显微镜直接对有丝分裂和染色体进行观察。染色体的观察既可加强人们对于染色体 及有丝分裂原理的认知，也可在物种亲缘关系鉴定、染色体变异、杂种分析等工作中有着广 泛的用途。 1 ．核型的概念 核型 （karyotype ）是指细胞核内染色体群的形态而言，是一个物种的体细胞内染色体数 目、形态、长度等情况的总和。因此可以用核型代表生物的不同类型和特征。1922 年，德 劳内（Delaunay ）曾把核型作为系统学和分类学的单位。他认为从分类系统上看原始物种的 染色体较长，而新的属染色体较短，因而染色体的缩短是核型的进化。有学者观察到核型在 种、属间有渐变的差异，因此认为核型不是固定不变的。 核型研究的新趋势是研究染色体形态、结构和功能的关系。除了观察有丝分裂中期染色 体的数目、形态，各染色体间的差异，初缢痕和次缢痕的位置，随体的大小及数目外，还要 4 2 普通遗传学实验指导（第 版） 注意染色体的结构、带型及间期染色质的形态差异等。 2 ．核型分析的内容 （1 ）染色体数目：通常统计根尖、茎尖等体细胞的染色体数目。 （2 ）染色体形态：观察染色体的长度、着丝粒及次缢痕的位置、随体的形态等。 a．长度测定：染色体通常为棒状，在测量时从染色体的一端到另一端的线性长度，通常 以微米 （m ）表示。 μ 绝对长度：指在显微镜下用测微尺直接测量的长度。染色体的绝对长度常因分裂期的差 异、处理方法的不同而有所变化，因此绝对长度的数据也只有相对意义。 相对长度：是每条染色体的绝对长度与正常细胞全部染色体总长度的比值，通常用百分 比表示。相对长度不会因分裂期和处理方法的不同而产生差异，因此是可靠的，所以，染色 体的长度常常以相对长度表示。 b．着丝粒的位置：一般来说，每条染色体着丝粒的位置是恒定的。染色体的两臂常在着 丝粒处呈不同程度的弯曲。着丝粒位置的测定常用埃文斯 （1961 ）提出的方法，即以染色体 的长臂 （L ）和短臂 （S ）的比值来确定 （表 1-1 ）。 表1-1　不同着丝粒的臂比和表示符号 着丝粒位置 臂比 （长臂/ 短臂） 表示符号 正中着丝粒 1 M 中部着丝粒 1～1.7 m 近中着丝粒 1.7～3.0 sm 近端着丝粒